小麥儲藏蛋白相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子及部分甲基化酶基因的分子鑒定.pdf

1、本研究利用同源序列技術(shù)結(jié)合RT-PCR方法從JN177、SR3、中國春小麥胚乳中分離了三種胚乳發(fā)育相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子SPA、PBF、GAMYB基因，通過聚類分析發(fā)現(xiàn)每一類轉(zhuǎn)錄因子在三種小麥種分別獲得屬于A、B、D三個亞基因組的各一個同源序列。序列相似性比較分析發(fā)現(xiàn)，每一種轉(zhuǎn)錄因子在不同小麥中相似度分別為95.73％、96.68％、98.6％，不同亞基因組同源基因間的高度相似性揭示了它們進化上的保守性。進一步對基因間SNPs統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，這三類轉(zhuǎn)

2、錄因子在小麥三個亞基因組的同源基因存在不同數(shù)量的SNPs，但是這些SNPs位點并不存在于保守結(jié)構(gòu)域內(nèi)。此外，從長穗堰麥草葉子中克隆得到了GAMYB同源cDNA序列，序列比較研究表明雜種小麥SR3的GAMYB-A與來源于JN177的-A高度同源，而-D與高冰草來源的高度同源。本研究還通過半定量及實時定量PCR的方法分析了三類轉(zhuǎn)錄因子在種子發(fā)育不同時期表達量的變化，并比較它們在中國春、JN177和SR3中的表達量差異發(fā)現(xiàn)，這三類轉(zhuǎn)錄因子在種

3、子發(fā)育不同時期的表達量均存在不同程度的變化，且SR3中的表達量明顯高于中國春和JN177中的表達量。本研究亞細胞定位實驗發(fā)現(xiàn)，SPA和PBF均定位在細胞核中，而GAMYB在細胞核和細胞質(zhì)中均有分布。根據(jù)表達量的差異，選擇來自SR3的三類轉(zhuǎn)錄因子轉(zhuǎn)化小麥，通過PCR分析，共獲得15棵陽性苗。本研究所得結(jié)果將有助于深入研究三類轉(zhuǎn)錄因子在調(diào)控谷醇溶蛋白表達中的作用。
　　此外，我們還通過電子克隆的方式拼接得到了五個小麥甲基化酶基因序列，