發(fā)夾型熒光分子探針用于DNA甲基化酶的研究.pdf

1、DNA甲基化是DNA與甲基化酶相互作用的結果，是DNA分子重要的堿基修飾方式之一，它可以影響到核酸的結構以及與蛋白質的相互作用等，進而影響到基因表達和腫瘤的發(fā)生發(fā)展，因而是一個引起廣泛興趣的研究領域。本論文利用熒光分子探針設計簡便、靈活的特點，著眼于研究DNA與甲基化酶相互作用，開展的工作主要包括以下三個方面： 1.發(fā)夾型熒光分子探針用于DNA甲基化酶的活性分析及其在藥物篩選中的應用 設計了莖部較長的發(fā)夾型熒光分子探針，

2、該探針比傳統(tǒng)的分子信標熒光探針具有更高的穩(wěn)定性，甲基化酶和相應的限制性內切酶的識別位點被設計在發(fā)夾型探針的莖部，熒光基團被連接在探針的5'端，其熒光被連在3'端的熄滅基團所熄滅。限制性內切酶可切割未發(fā)生甲基化修飾的探針，導致探針的發(fā)夾結構遭到破壞，引起熒光基團熒光信號的恢復。根據(jù)熒光信號的恢復程度可實現(xiàn)對甲基化酶活性的分析。在此基礎上，建立了一種簡便、快速分析抗腫瘤藥物對DNA甲基化酶活性的影響的方法，為篩選針對基因甲基化異常引起的惡性

3、腫瘤的治療藥物提供了一種新的思路和方法。 2.發(fā)夾型熒光分子探針用于實時監(jiān)測TaqⅠ甲基化酶對DNA的甲基化 利用發(fā)夾型熒光分子探針設計的靈活性，根據(jù)TaqⅠ甲基化酶和DpnⅠ限制性內切酶識別序列關系，在分子探針的莖部設計了兩個相鄰的TaqⅠ甲基化酶的識別位點，當探針莖部兩個識別位點被TaqⅠ甲基化酶修飾時可形成限制性內切酶DpnⅠ的切割位點，發(fā)夾結構的莖部被DpnⅠ切割而釋放熒光信號，實現(xiàn)了實時監(jiān)測TaqⅠ甲基化酶對分