家蠅轉(zhuǎn)錄組測定及4種抗逆基因功能鑒定.pdf

1、本研究首次利用454測序方法獲得了家蠅轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)，為研究家蠅抗逆機制提供了重要信息。根據(jù)家蠅轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)鑒定了7條與抗逆相關(guān)的基因，包括I種熱休克蛋白7O基因（MdHSP7O-I），Z種金屬硫蛋白基因（MdMTI，MdMTZ），3種超氧化物歧化酶基因（MdSODI，MdSODZ，MdSOD3）以及I種硫氰酸生成酶樣蛋白基因（MdRhOdIikeI），通過qPCR RNAi重組表達細胞轉(zhuǎn)染W(wǎng)estern等技術(shù)對這些基因進行了功能研究，主要研

2、究結(jié)果如下：
　　1、通過454測序獲得了Z49555條ESTs序列（平均長度為373 bP）。這些序列經(jīng)過生物信息組裝成I3ZO6條COntig和ZO556條SingIetOn。通過核酸序列搜索SwissPrOt和Nr數(shù)據(jù)庫蛋白，確定4sI4條COntig和sI66條SingIetOn為獨立序列（unique sequenCe）。通過GO分析將注釋序列進行了分類，KEGG分析將ZI64條unique sequenCe定位到Is4

3、條KEGG通路。
　　2、通過qPCR技術(shù)，對這7個基因在熱激，重金屬CdZ＋刺激以及細菌感染3個脅迫條件下分別進行了基因定量分析。在4Z℃高溫下，MdMTZ首先在熱激Ih時出現(xiàn)高峰，其余基因在熱激后恢復(fù)Ih時到達高峰。在CdZ＋刺激時，MdMTI和MdMTZ在IOmMCdZ＋處理IZh出現(xiàn)峰值，除MdRhOdIikeI基因表達模式無規(guī)律性外，其余基因在3OmMCdZ＋處理Z4h時mRNA表達水平較高。革蘭氏陽性金黃色葡萄球菌和革

4、蘭氏陰性大腸桿菌感染幼蟲Z4h時，MdHSP7O-I和MdRhOdIikeI的mRNA表達水平出現(xiàn)峰值，其余基因在感染6Oh時mRNA表達水平最高。這些結(jié)果展現(xiàn)了這7個基因在不同環(huán)境刺激時的應(yīng)答表達變化模式。
　　3、運用RNA干擾技術(shù)成功敲低抗逆基因，受到干擾敲低的家蠅幼蟲群體在應(yīng)對高溫CdZ＋和細菌感染的脅迫時，存活率明顯下降，實驗結(jié)果提示這些基因在家蠅抵抗外界脅迫的過程中具有重要的作用。
　　4、運用原核表達系統(tǒng)進行體