2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、鎘是一種生物毒性極強(qiáng)的金屬元素。環(huán)境中,尤其是土壤中的鎘極易被植物吸收,進(jìn)而通過食物鏈逐級富集,嚴(yán)重危及人體健康。超積累生態(tài)型(HE)東南景天是一種原生于我國的鎘超積累植物,它能夠在地上部累積超過5,000 mg/kg的鎘而不表現(xiàn)出明顯的毒害癥狀,是一種較為理想的生物修復(fù)材料。對東南景天鎘超積累機(jī)制,尤其是分子機(jī)制的深入研究有助于揭示植物體金屬穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò),挖掘鎘超積累關(guān)鍵基因,為創(chuàng)新植物修復(fù)材料提供基因素材。過往在東南景天上開展的研究

2、多集中在生理層面,由于缺乏基因組序列信息,對這些生理過程背后所蘊(yùn)含生化機(jī)制的研究進(jìn)展相對滯后,成為東南景天超積累機(jī)制研究中的短板。鑒于此,本研究綜合利用二代測序技術(shù)Roche454平臺和Illumina/Solexa平臺測定并構(gòu)建了HE東南景天地上部轉(zhuǎn)錄組序列信息;并以此為基礎(chǔ),研究HE東南景天地上部轉(zhuǎn)錄組對鎘脅迫的響應(yīng);從中選取代表性的基因,利用實(shí)時熒光定量PCR(q-RT-PCR)技術(shù),分別對比研究超積累與非超積累生態(tài)型(NHE)東

3、南景天中所選基因在正常生長及鎘處理?xiàng)l件下的響應(yīng)差異,以期揭示東南景天地上部鎘超積累的分子機(jī)制。
   此外,本研究還從轉(zhuǎn)錄組序列數(shù)據(jù)庫中選取ZIP家族基因?yàn)槔C合利用cDNA末端快速擴(kuò)增技術(shù)(RACE)、q-RT-PCR、酵母功能互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)及生物信息學(xué)分析方法克隆得到3個ZIP基因,并初步研究了其基因特性與功能。具體研究結(jié)果如下:
   1.利用Roche454和Illumina/Solexa平臺測定并構(gòu)建了HE東南景天

4、地上部轉(zhuǎn)錄組序列信息。在Roche454平臺上共獲得135,894條平均長度為286bp的高質(zhì)量測序讀長;在Illumina/Solexa測序平臺上獲得4,750余萬條,總計(jì)9.4 Gb的序列信息。以Roche454測序結(jié)果作為拼裝骨架,結(jié)合Illumina/Solexa平臺的海量數(shù)據(jù)構(gòu)建HE東南景天地上部轉(zhuǎn)錄組序列信息,共拼裝得到57,162條長于200bp的Contigs。利用蛋白數(shù)據(jù)庫,對其中的編碼基因進(jìn)行功能注釋。根據(jù)GO分析,

5、這些基因主要涉及代謝、生物大分子代謝、生物合成等生理過程,參與結(jié)合、催化、蛋白結(jié)合等分子功能。代謝通路分析表明,所拼裝得到的Contigs主要涉及生物體內(nèi)37條代謝通路,其中與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)的高達(dá)6,695條,占總數(shù)的11.7%。另有671條Contigs參與編碼轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子,包括鋅指蛋白(16.3%)、MYB(16.2%)、bHLH(12.5%)和bZIP(8.3%)家族等;
   2.對所構(gòu)建的HE東南景天地上部轉(zhuǎn)錄組序列進(jìn)行

6、生物信息學(xué)分析,結(jié)果表明,HE東南景天與已完成全基因組測序的物種序列相似度較低,與模式植物擬南芥的相似度不足40%,親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。利用生物信息學(xué)軟件,在HE東南景天的轉(zhuǎn)錄組中找到6,176條較理想的簡單重復(fù)序列(SSR),為構(gòu)建東南景天分子標(biāo)記提供了豐富素材。對景天酸代謝關(guān)鍵基因磷酸烯醇丙酮酸羧化酶(PEPC)的分析表明,HE東南景天兼有C3和景天酸代謝(CAM)型PEPC特征;
   3.對比加鎘處理與對照條件下HE東南景天地

7、上部轉(zhuǎn)錄組的表達(dá)變化差異,發(fā)現(xiàn)有110條Contigs表達(dá)顯著上調(diào),另有123條Contigs表達(dá)被抑制。利用q-RT-PCR對代表性基因的表達(dá)水平進(jìn)行驗(yàn)證,與Solexa測序結(jié)果一致,表明Solexa法測得的基因表達(dá)數(shù)據(jù)具有較高的可靠性。在基因表達(dá)水平發(fā)生顯著變化的Contigs中,大多為功能未知基因,尤其是表達(dá)受抑的Contigs中,近一半功能未知。將其余基因進(jìn)行富集分析,按照GO分類,主要涉及細(xì)胞外空間,氨基酸及其衍生物代謝,催化

8、活性與大分子代謝;按照代謝通路分類,則主要與次生代謝物合成,能量代謝,代謝病及位于膜上的轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)等相關(guān)。以富集分析結(jié)果為依據(jù),并結(jié)合基因功能注釋,可知鎘誘導(dǎo)下表達(dá)顯著上調(diào)的Contigs主要參與了植物體細(xì)胞壁合成、沉積與修飾,金屬螯合物合成、金屬離子及其配合物轉(zhuǎn)運(yùn),抗氧化及基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)四大類生理過程;
   4.以HE與NHE東南景天為試驗(yàn)材料,利用q-RT-PCR法對比研究鎘超積累/耐性相關(guān)基因在兩種生態(tài)型東南景天地上部的表

9、達(dá)差異。參照鎘誘導(dǎo)條件下HE東南景天地上部轉(zhuǎn)錄組響應(yīng)情況及相關(guān)文獻(xiàn),選取了與細(xì)胞壁合成、修飾,抗氧化,金屬轉(zhuǎn)運(yùn),金屬螯合物合成等相關(guān)的18個基因,以HE東南景天地上部序列信息為依據(jù)設(shè)計(jì)引物,用PCR法在非超積累植物上進(jìn)行擴(kuò)增,結(jié)果表明,所設(shè)計(jì)引物均能在兩種生態(tài)型東南景天上特異擴(kuò)增。以植物體內(nèi)過氧化物酶基因的表達(dá)水平為依據(jù),確定5μM鎘處理下,NHE東南景天地上部中鎘的脅迫水平與HE東南景天在100μM鎘處理下的脅迫水平相當(dāng)。對比研究兩種

10、生態(tài)型東南景天在相似鎘脅迫條件下的基因表達(dá)差異,結(jié)果顯示,漆酶,肉桂酸羥化酶及Nramp2基因在HE中的表達(dá)水平要高于NHE,而Nramp3,HMA4和YSL3則是在NHE中顯著誘導(dǎo)。纖維素合成酶與S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因在HE中表達(dá)上調(diào),而在NHE中表達(dá)被抑制。進(jìn)一步對比研究正常生長狀況下兩種生態(tài)型東南景天地上部的基因表達(dá),結(jié)果顯示大多數(shù)與金屬轉(zhuǎn)運(yùn)、細(xì)胞壁合成及修飾相關(guān)的基因在正常生長條件下,其在HE內(nèi)的表達(dá)水平要組成性地高于NHE

11、東南景天;
   5.以HE東南景天轉(zhuǎn)錄組序列為依據(jù),根據(jù)功能注釋,從中選擇表達(dá)豐度較高的ZIP家族基因片斷Sa_contig615、contig3033和Sa_contig22157,利用RACE方法克隆全長,發(fā)現(xiàn)Sa_contig3033的全長序列與AtZIP1序列相似度較高,故命名為SaZIP1;相似地,將Sa_contig615和Sa_contig22157全長序列分別命名為SaZIP4與SaZIP11。拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)預(yù)測表明

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