水稻體細(xì)胞根芽再生的蛋白質(zhì)組學(xué)分析及相關(guān)基因功能驗(yàn)證.pdf

1、浙江大學(xué)農(nóng)業(yè)與生物技術(shù)學(xué)院博士學(xué)位論文水稻體細(xì)胞根芽再生的蛋白質(zhì)組學(xué)分析及相關(guān)基因功能驗(yàn)證姓名：張曉波申請學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：作物學(xué)指導(dǎo)教師：凃巨民20100101浙江大學(xué)博士學(xué)位論文摘要已經(jīng)完成，但在植株誘導(dǎo)培養(yǎng)基上的分化則仍在進(jìn)行，與前兩者相比滯后約35天。3體細(xì)胞根芽的蛋白質(zhì)組學(xué)分析對處在芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基和根誘導(dǎo)培養(yǎng)基上的不同分化時(shí)期的細(xì)胞組織，自第O天開始，每4天取一次樣抽提可溶性蛋白，并用蛋白雙向電泳技術(shù)進(jìn)行蛋白差異表達(dá)分析。通過

2、各分化時(shí)期不同再生樣品蛋白間電泳圖譜的PDQuest軟件比對分析，共鑒定出102個(gè)差異蛋白點(diǎn)，后經(jīng)蛋白質(zhì)質(zhì)譜分析確定出其中78個(gè)蛋白點(diǎn)共計(jì)83個(gè)蛋白的氨基酸序列，其中，有5個(gè)蛋白點(diǎn)包含2種蛋白。對這83個(gè)蛋白按其功能進(jìn)行分類，一共可分為10類，前四類分別為功能未知(36％)，蛋白代謝相關(guān)(15％)，防御相關(guān)(14％)，代謝相關(guān)(12A)，占測序蛋白總數(shù)的77％。4根芽發(fā)育相關(guān)基因的克隆及功能分析本研究克隆了對應(yīng)于蛋白點(diǎn)5108(序號(hào)由軟

3、件PDQuest自動(dòng)生成)的基因，并對其具體的生物學(xué)功能進(jìn)行了初步分析和驗(yàn)證。結(jié)果證實(shí)蛋白點(diǎn)5108是一類含有一個(gè)胱氨酸殘基的過氧還蛋白(1CysProxiredoxin)，對水稻中脈的發(fā)育起調(diào)控作用。RNAi抑制分析表明，一旦該基因的表達(dá)受到抑制，水稻葉片的中脈發(fā)育異常，中脈內(nèi)的24個(gè)大氣腔消失，因而，不能對葉片起剛性支撐作用，葉片從葉枕到葉基部處扭曲下垂，以至葉片的背面朝向陽光。從外表上看，原本在葉片背面突出的中脈消失，大小變成與側(cè)