轉(zhuǎn)TrxS基因啤酒大麥種子蛋白質(zhì)組學(xué)分析.pdf

1、啤酒大麥籽粒蛋白質(zhì)含量的高低及其在制麥過(guò)程中代謝速率的快慢是決定其釀造品質(zhì)優(yōu)劣的關(guān)鍵。本文首先以轉(zhuǎn)外源TrxS基因啤酒大麥株系Franklin及Harrington(分別以F、H表示)的種子為試驗(yàn)材料,利用分步提取法分析轉(zhuǎn)基因及對(duì)照株系在籽粒萌發(fā)前后胚乳貯藏蛋白組分的含量變化,以及利用SDS-PAGE技術(shù)尋找差異表達(dá)蛋白,試圖從蛋白組學(xué)角度探索導(dǎo)入外源TrxS基因?qū)ζ【拼篼湻N子萌發(fā)速率的影響及對(duì)其品質(zhì)改良方面的可行性；其次,以2個(gè)轉(zhuǎn)Tr

2、xS基因啤酒大麥矮化株系H-7-5-14-2和H-7-5-14-5為試驗(yàn)材料,以轉(zhuǎn)基因正常株系及非轉(zhuǎn)基因H-CK為對(duì)照,在對(duì)其花后15d成熟植株株高農(nóng)藝表型進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析的基礎(chǔ)上,采用傳統(tǒng)TCA-Ac法提取轉(zhuǎn)基因矮化株系H-7—5-14-2的種子及幼苗(三葉期)葉片總蛋白(以H-CK為對(duì)照),通過(guò)雙向凝膠電泳技術(shù)對(duì)其表達(dá)譜分別做了初步研究。主要研究結(jié)果如下:
　　 1.對(duì)成熟期及萌發(fā)期種子貯藏蛋白的含量測(cè)定結(jié)果表明,轉(zhuǎn)TrxS基因

3、株系種子胚乳內(nèi)總蛋白及貯藏蛋白組分的含量與非轉(zhuǎn)基因?qū)φ臻g無(wú)顯著差異；萌發(fā)2d時(shí),轉(zhuǎn)基因株系胚乳中總蛋白迅速分解、含量下降,球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白含量變化趨勢(shì)與總蛋白類似,含量迅速下降(個(gè)別株系有例外),清蛋白含量上升,并與對(duì)照間達(dá)極顯著水平。
　　 2.供試株系籽粒萌發(fā)前后胚乳內(nèi)貯藏蛋白組分SDS-PAGE圖譜顯示:(1)清蛋白圖譜中,籽粒萌發(fā)2d時(shí),高分子量條帶數(shù)減少,相應(yīng)低分子量約10-16 kD處的蛋白條帶數(shù)目增加；(2

4、)球蛋白圖譜中,F株系籽粒未萌發(fā)時(shí),在66.2-94.0 kD和35.0-45.0 kD之間各有一條表達(dá)量明顯不同的蛋白條帶；H-CK籽粒萌發(fā)2d時(shí),在靠近66.2 kD下方及45.0 kD上方各有一蛋白條帶發(fā)生降解,在其相應(yīng)各轉(zhuǎn)基因株系中未能看到這一變化；(3)醇溶蛋白圖譜中,F、H-CK與其各自轉(zhuǎn)基因株系相比,在35.0-45.0 kD之間均出現(xiàn)一條特異表達(dá)的蛋白條帶,籽粒萌發(fā)2d時(shí),該條帶未見(jiàn)降解；(4)谷蛋白圖譜中,籽粒萌發(fā)前后