TrxS基因的表達(dá)及其對(duì)啤酒大麥發(fā)芽種子水解酶和貯藏物質(zhì)降解的影響.pdf

1、以轉(zhuǎn)TrxS基因啤酒大麥晉引六號(hào)(JY6)純合株系籽粒和未轉(zhuǎn)基因?qū)φ諡椴牧?，研究了TrxS基因的表達(dá)及其對(duì)啤酒大麥發(fā)芽種子水解酶和貯藏物質(zhì)降解的影響。主要結(jié)論如下： 1、TrxS基因在啤酒大麥中的表達(dá) 用Trizol提取發(fā)芽3天的轉(zhuǎn)基因和對(duì)照籽粒中的總RNA，采用RT-PCR技術(shù)證明了TrxS基因在轉(zhuǎn)錄水平上得到表達(dá)。測(cè)定了轉(zhuǎn)基因大麥和對(duì)照發(fā)芽籽粒中硫氧還蛋白h(Trxh)活性，結(jié)果表明，轉(zhuǎn)基因籽粒和對(duì)照Trxh活性變化

2、趨勢(shì)相同，但轉(zhuǎn)基因籽粒Trxh活性始終高于對(duì)照，在第2～4天分別比對(duì)照的最大值高17.61％、16.21％和6.35％。而且轉(zhuǎn)基因籽粒中Trxh活性高峰值還比對(duì)照提前，證明了TrxS基因的表達(dá)對(duì)Trxh催化活性的增強(qiáng)作用。 2、TrxS基因?qū)Πl(fā)芽種子淀粉水解酶和淀粉降解的影響 研究了TrxS基因?qū)Πl(fā)芽籽粒中α-淀粉酶活性、α-淀粉酶抑制蛋白含量、游離態(tài)β-淀粉酶活性、束縛態(tài)β-淀粉酶活性、極限糊精酶活性和淀粉含量的影響。

3、結(jié)果表明：轉(zhuǎn)基因大麥籽粒中α-淀粉酶活性高于對(duì)照，α-淀粉酶同工酶帶比對(duì)照提前一天出現(xiàn)；α-淀粉酶抑制蛋白的降解速度快于對(duì)照，比對(duì)照早1天消失。說明TrxS基因的表達(dá)，通過還原α-淀粉酶抑制蛋白中的二硫鍵使其失活和促進(jìn)發(fā)芽籽粒中α-淀粉酶抑制蛋白的降解，也相應(yīng)提高了籽粒中α-淀粉酶活性。 轉(zhuǎn)基因籽粒在發(fā)芽時(shí)游離態(tài)β-淀粉酶活性高于對(duì)照，同工酶帶也比對(duì)照增強(qiáng)；同時(shí)，束縛態(tài)β-淀粉酶轉(zhuǎn)化為游離態(tài)β-淀粉酶加快，比對(duì)照提早1天充分釋放

4、，表明TrxS基因的表達(dá)，一方面有利于維持巰基蛋白酶中的巰基(-SH)的存在，使巰基蛋白酶保持酶活性和發(fā)揮作用，促進(jìn)束縛態(tài)β-淀粉酶向游離態(tài)β-淀粉酶的轉(zhuǎn)變；另一方面，Trxh的活性的提高，也有利于維持游離態(tài)β-淀粉酶中的巰基(-SH)的存在，使其保持酶活性和發(fā)揮作用，因而提高了游離態(tài)β-淀粉酶的活性。轉(zhuǎn)基因籽粒在發(fā)芽時(shí)極限糊精酶活性也得到提高。 轉(zhuǎn)基因籽粒在發(fā)芽時(shí)淀粉含量下降加快，也說明TrxS基因的表達(dá)通過淀粉酶活性的提高，

5、促進(jìn)了籽粒中淀粉的降解。 3、TrxS基因?qū)Πl(fā)芽種子蛋白酶和蛋白質(zhì)降解的影響 研究了TrxS基因?qū)Πl(fā)芽籽粒中蛋白酶活性，不同蛋白組分即清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白中巰基含量以及四種蛋白質(zhì)含量、主要貯藏蛋白醇溶蛋白和谷蛋白SDS-PAGE圖譜的影響。結(jié)果表明：轉(zhuǎn)基因籽粒在發(fā)芽時(shí)蛋白酶活性明顯提高，這可能是TrxS基因的表達(dá)通過還原種子中蛋白酶抑制劑分子內(nèi)的二硫鍵(S-S)使其加速失活，同時(shí)有利于巰基蛋白酶中還原性巰基的

6、存在，也進(jìn)一步促進(jìn)了巰基蛋白酶對(duì)蛋白酶抑制劑的降解作用。 轉(zhuǎn)基因籽粒在發(fā)芽時(shí)清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白等四種蛋白組分中巰基含量顯著高于對(duì)照，說明TrxS基因?qū)氪篼満?，促進(jìn)了胚乳蛋白中二硫鍵(S-S)向巰基(-SH)的轉(zhuǎn)化，提高了籽粒中胚乳蛋白的還原狀態(tài)和可溶性。同時(shí)蛋白酶活性的提高，加速了蛋白的降解。因此，轉(zhuǎn)基因籽粒中醇溶蛋白和谷蛋白含量比對(duì)照顯著降低，降解速率也快于對(duì)照，尤其是分子量介于31.0kDa～66.2kDa之