水稻Rho GDP解離抑制因子OsRhoGDI2基因功能的初步鑒定.pdf

1、OsRacD是水稻小GTP結(jié)合蛋白Rho家族的一個新成員,已有的研究結(jié)果顯示,OsRacD的功能之一是通過調(diào)控花粉管的延伸生長,參與水稻的育性控制,是一個重要的發(fā)育調(diào)控基因和信號通路中的開關(guān)分子。為進(jìn)一步研究OsRaeD相關(guān)信號通路及互作蛋白,梁衛(wèi)紅等以O(shè)sRacD為誘餌,采用酵母雙雜交技術(shù)篩選了水稻幼穗cDNA文庫,獲得了若干潛在互作蛋白編碼基因的eDNA序列?；诒緦嶒炇覍sRacD及其互作蛋白的研究,本論文對已經(jīng)鑒定的一個負(fù)調(diào)控

2、OsRacD活性的鳥苷酸解離抑制因子的編碼基因—OsRhoGDI2進(jìn)行了系列研究,對該基因在水稻育性控制的功能進(jìn)行了初步鑒定。
　　 采用生物信息學(xué)分析,預(yù)測和比較了OsRhoGDI2和OsRaeD蛋白的理化特點、修飾位點和亞細(xì)胞定位,進(jìn)而構(gòu)建了受控于CaMV35S啟動子的與綠色熒光蛋白融合表達(dá)的OsRhoGDI2基因的雙元植物表達(dá)載體pCAMBIAl302-OsRhoGDI2-GFP,采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化洋蔥表皮細(xì)胞,通過熒光

3、顯微鏡觀察了融合蛋白在活細(xì)胞內(nèi)分布特點,證實OsRhoGDI2和OsRacD具有一些相似的理化特性和翻譯后修飾位點,OsRhoGDI2融合蛋白主要分布在細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞膜和細(xì)胞核。OsRhoGDI2與OsRacD在蛋白理化特性和胞內(nèi)分布上存在的相關(guān)性提示,OsRhoGDI2蛋白可能在調(diào)控OsRacD的胞內(nèi)分布和活性中發(fā)揮重要作用。
　　 為確定OsRhoGD12基因的功能,借助農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將雙元植物表達(dá)載體pCAMBIA1302-O

4、sRhoGDI2-GFP轉(zhuǎn)化水稻愈傷,經(jīng)過浸染、篩選和分化,獲得了12株分化苗,經(jīng)基因組DNA的PCR檢測,獲得7株陽性轉(zhuǎn)基因水稻。半定量RT-PCR檢測結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)基因水稻中OsRhoGDI2基因轉(zhuǎn)錄水平顯著高于對照,說明OsRhoGDI2基因在CaMV35S啟動子下,能夠在水稻中過表達(dá)。表型分析顯示,與對照水稻相比,轉(zhuǎn)基因水稻的分蘗數(shù)和總稻粒數(shù)變化不大,而授粉粒數(shù)和結(jié)實率明顯降低。統(tǒng)計分析顯示,轉(zhuǎn)基因水稻的授粉率和結(jié)實率顯著降低,大