人UBF新基因功能的初步研究.pdf

1、UBF(GenBank注冊名：UBFfl-AF294842)基因來源于本室人胎肝cDNA文庫大規(guī)模測序的EST庫(HA2180)，經(jīng)進一步測序獲得。根據(jù)該基因核苷酸序列的5'-端有高比例GC特征，在起始密碼子前的同相位上有連續(xù)兩個終止密碼子，3'-端有poly-A尾的特點，認為它是一條全長cDNA序列?；蚪M結(jié)構(gòu)分析證實UBF由一個外顯子組成，不含任何內(nèi)含子。電子PCR染色體定位提示，UBF定位于人染色體19q13.4。核苷酸和氨基酸序

2、列同源性比較結(jié)果顯示，UBF基因與泛素結(jié)合酶家系成員高度同源。開放閱讀框(ORFFinder)軟件分析結(jié)果提示，該基因可能含有兩個開放閱讀框(ORF)，分別編碼89個和105個氨基酸，兩ORF之間相隔30個核苷酸，包括前一個ORF的終止密碼子。人胎肝和HL-60細胞mRNA的RT-PCR產(chǎn)物直接測序結(jié)果證實了該基因的天然屬性及中間終止密碼子的客觀實在性；基因轉(zhuǎn)染及體外翻譯實驗結(jié)果提示UBF基因中第一個ORF是編碼序列，其后包括第二個OR

3、F在內(nèi)的序列為3'端非翻譯區(qū)。對UBF基因功能的進一步研究發(fā)現(xiàn)，將該基因?qū)氲紺OS7細胞內(nèi)進行高表達時，與對照組相比，可導(dǎo)致COS7細胞的凋亡；為了進一步探討UBF的功能及作用機理，后期實驗中引入Tet-on/off基因表達系統(tǒng)，研究結(jié)果顯示，UBF在CHO細胞內(nèi)穩(wěn)定表達后，出現(xiàn)幾乎百分之百的多倍體細胞。上述實驗結(jié)果給UBF基因的功能研究提供了一定線索，具體作用機理尚待進一步研究。UBF是一條來源于高度進化的人類的胎肝組織的新基因，注