番茄維生素C代謝相關基因功能的初步鑒定.pdf

1、維生素C，又名抗壞血酸(L-ascorbicacid,AsA)，是植物和大多數動物體內合成的一類含量豐富的己糖內酯化合物。植物中AsA的重要性不僅在于它為不能正常合成AsA的少數動物(包括人類)提供豐富的維生素C源，而且近年來的研究發(fā)現(xiàn)，AsA對于植物自身的抗氧化、光合保護以及調節(jié)生長發(fā)育等都具有非常重要的作用。盡管抗壞血酸具有重要的功能，但到目前為止，人們對其生物合成和代謝的認識仍很不完全，其中許多代謝相關的酶編碼基因都沒有克隆到。R

2、NAi技術作為基因功能研究的一種有效手段得到了廣泛的應用。本研究旨在利用RNAi技術初步鑒定抗壞血酸代謝相關基因的功能，評價轉基因調控抗壞血酸代謝的效果，并獲得具有應用潛力的高含量抗壞血酸的番茄材料。 本研究綜合利用分子生物學和生物信息學方法手段，對不同物種的EST數據庫(TIGR)進行基因序列比較和分析，初步候選出番茄兩個抗壞血酸代謝酶基因，即抗壞血酸過氧化酶(APX，Ascorbateperoxidase)基因與抗壞血酸氧化

3、酶啟動子結合蛋白(AOBP,Ascorbateoxidasepromoter-bindingprotein)基因。利用RT-PCR獲得這兩個基因的部分cDNA片段，并將其構建到植物RNAi研究載體pHGRV中，通過對轉基因番茄植株及其后代的生理生化特性的鑒定分析，表明這兩個基因在一定程度上調控著番茄抗壞血酸的代謝。獲得的主要結果如下： 1.利用生物信息學手段，根據基因表達的時空特性，在TIGREST數據庫中候選出兩個編號分別為T

4、C154675、TC155602電子克隆基因，預測TC154675可能是APX基因；而TC155602則可能為AOBP基因。 2.通過RT-PCR獲得這兩個基因的部分片段，并構建了這兩個片段的RNAi植物研究載體；利用農桿菌介導的遺傳轉化方法將它們成功導入番茄品系A57中。 3.提取部分T0代轉化番茄PCR陽性植株的基因組DNA，經Southern雜交分析，證明載體的TDNA區(qū)段已經整合到番茄基因組中。 4.A5