南疆溫室番茄粉虱傳雙生病毒的分子鑒定.pdf

1、雙生病毒是單鏈環(huán)狀DNA病毒,它是植物病毒中唯一的一類孿生病毒。新疆2012年初在喀什地區(qū)莎車和澤普兩縣溫室番茄發(fā)現(xiàn)了類似番茄黃花曲葉病毒病害,為了明確危害新疆南疆番茄的病毒種類以及分布情況,在南疆溫室番茄進(jìn)行了病害調(diào)查,并對(duì)采集的樣品進(jìn)行了分子檢測(cè)和鑒定。
　　分別從新疆喀什地區(qū)的莎車縣,麥蓋提縣,葉城縣以及和田地區(qū)的于田縣采集了20份表現(xiàn)典型雙生病毒病毒癥狀的番茄樣品,用雙生病毒的通用引物PA和PB進(jìn)行PCR擴(kuò)增,結(jié)果均擴(kuò)增到

2、約500bp的特異片段,表明所有番茄樣品都被雙生病毒感染。從中選取4株,對(duì)其PCR產(chǎn)物進(jìn)行克隆和測(cè)序,得到的核酸片段都為540bp,相互之間的序列相似性為97.1％-99.3%,說明南疆番茄是由同一種雙生病毒侵染。
　　隨機(jī)選取分離物KS2-5進(jìn)行全基因組的克隆和測(cè)序,得到KS2-5DNA全長(zhǎng)為2781nt(登錄號(hào):JQ807735),具有典型的煙粉虱傳雙生病毒基因組特征:閉合環(huán)狀的單鏈DNA,共編碼6個(gè)開放閱讀框架(ORF)。病

3、毒鏈編碼2個(gè)ORFs,分別是AV1和AV2?；パa(bǔ)鏈編碼4個(gè)ORFs,分別是C1、C2、C3和C4。序列同源性比對(duì)分析表明,KS2-5與番茄黃化曲葉病毒(TYLCV)同源性達(dá)到98.6%~99.5%,而與其他來自亞洲和非洲WTG(whitefly-transmittedgeminivirus)的序列相似性卻很低,為68.3%~75.8%,根據(jù)國際病毒分類標(biāo)準(zhǔn),初步證明KS2-5是TYLCV的一個(gè)分離物,表明危害南疆溫室番茄的病毒種類為TY