雜交三倍體泥鰍的染色體組穩(wěn)定性研究.pdf

1、為探討多倍體魚類雜交后代的染色體組穩(wěn)定性,本研究以不同倍性鹽藻促有絲分裂活化蛋白激酶基因DsMAPK的克隆與表達
　　為研究對象制備一種新型雜交三倍體泥鰍(正交2n×4n,反交4n×2n),并采用空氣干燥法制備染色體標本,對其雜交后代的染色體數(shù)目、核型、帶型及染色體熒光原位雜交(FISH)進行系統(tǒng)研究,具體結(jié)果如下:
　　1.不同倍性泥鰍雜交后代染色體數(shù)目組成
　　(1)雜交三倍體泥鰍早期發(fā)育情況:對照組(87.45%

2、)、正交組(81.47%)、反交組(80.68%)三組之間平均受精率差異性不顯著(p>0.05);對照組(81.35%)與正交組(87.73%)、正交組(87.73%)與反交組(90.13%)之間平均孵化率差異不顯著(p>0.05);對照組(93.00%)與反交組(92.02%)間孵化率差異顯著(p<0.05);正交組(96.44%)與反交組(92.02%)兩組之間正常孵化率差異極顯著(p<0.01);對照組(83.55%)、正交組(9

3、1.93%)、反交組(87.66%)三組之間平均成活率差異顯著(p<0.05);正交組(91.93%)與反交組(87.66%)兩組之間平均成活率差異極顯著(p<0.01)。
　　(2)雜交三倍體泥鰍不同發(fā)育階段的倍率變化:正交雜交三倍體泥鰍早期混合胚胎、6月齡及12月齡3個階段的整三倍體率(3n=75)分別為22%、26%和28%,反交三倍體泥鰍3個階段的整三倍體率分別為20%、41%和54%;正交雜交三倍體泥鰍3個階段的非整三倍

4、體率(3n>75 or3n<75)分別為78%、74%和72%,反交雜交三倍體泥鰍3個階段的非整三倍體率分別為80%、59%和46%。
　　(3)正反雜交三倍體泥鰍早期單個胚胎的染色體組成:對照組的單個胚胎染色體數(shù)目在41-50范圍內(nèi),在單個胚胎中整二倍體率為50%、非整二倍體率為50%;正交雜交組的單個胚胎染色體數(shù)目在64-82范圍內(nèi),在統(tǒng)計的30個單個胚胎中整三倍體率為45.8%,亞三倍體率為26.9%,超三倍體率為27.3%

5、;反交雜交組的單個胚胎染色體數(shù)目在61-82范圍內(nèi),在統(tǒng)計的30個單個胚胎中整三倍體率為42%,亞三倍體率為47.8%,超三倍體率為10.2%。
　　(4)雜交三倍體泥鰍的不同階段染色體核型分析:早期胚胎階段正交組整三倍體染色體數(shù)目為3n=75,核型為15m+6sm+54t,NF=96;亞三倍體染色體數(shù)目為3n=73,核型為15m+6sm+52t, NF=94;超三倍體染色體數(shù)目為3n=76,核型為16m+6sm+54t, NF=

6、98;六月齡正交組整三倍體染色體數(shù)目為3n=75,核型為15m+6sm+54t,NF=96;亞三倍體染色體數(shù)目為3n=72,核型為15m+6sm+51t,NF=93;超三倍體染色體數(shù)目為3n=77,核型為15m+6sm+56t,NF=98;十二月齡正交組整三倍體染色體數(shù)目為3n=75,核型為12m+8sm+55t,NF=95;亞三倍體染色體數(shù)目為3n=71,核型為16m+6sm+49t,NF=93;超三倍體染色體數(shù)目為3n=76,核型為

7、18m+8sm+50t,NF=102;早期胚胎階段反交組整三倍體染色體數(shù)目為3n=75,核型為14m+9sm+52t,NF=98;亞三倍體染色體數(shù)目為3n=73,核型為13m+6sm+54t, NF=92;超三倍體染色體數(shù)目為3n=77,核型為18m+7sm+52t,NF=102;六月齡反交組整三倍體染色體數(shù)目為3n=75,核型為15m+5sm+55t,NF=95;亞三倍體染色體數(shù)目為3n=73,核型為13m+6sm+54t, NF=9

8、2;超三倍體染色體數(shù)目為3n=76,核型為14m+6sm+56t,NF=96;十二月齡反交組整三倍體染色體數(shù)目為3n=75,核型為16m+6sm+53t,NF=97;亞三倍體染色體數(shù)目為3n=72,核型為13m+6sm+53t, NF=91;超三倍體染色體數(shù)目為3n=77,核型為13m+6sm+58t,NF=96。
　　2.雜交三倍體泥鰍的 Ag-NORs, CMA3/DA/DAPI, FISH
　　(1) Ag-NORs:

9、對照組2n×2n雜交后代間期核及中期分裂相中最高銀染點數(shù)為2個,雜交組(2n×4n、4n×2n)雜種后代間期核及中期分裂相中最高銀染點數(shù)為3個,經(jīng)核型分析均位于第1對中部著絲粒染色體(M1)的端部區(qū)域。
　　(2) CMA3/DA/DAPI:對照組2n×2n中第1對中部著絲粒染色體(M1)的端部區(qū)域顯示有2個明亮的 CMA3陽性部位,雜交組(2n×4n、4n×2n)中第1對中部著絲粒染色體(M1)的端部區(qū)域顯示有3個明亮的 CMA