生物工程專業(yè)畢業(yè)論文

1、<p><b>　　1 引言</b></p><p>　　隨著各種生物活性短肽的不斷發(fā)現(xiàn)，其研究和開發(fā)日益受到人們的關注。大量科學研究表明，通過選擇適當?shù)牡鞍酌杆獾鞍踪|可以得到大量具有各種生物功能的多肽，這些多肽不僅具有較高的活性，而且來源廣泛、成本低、安全性好，制備操作簡單、便于工業(yè)化生產(chǎn)，因此已成為科學研究的新熱點[1]。</p><p>　　小麥麩皮

2、是小麥加工的副產(chǎn)品，含有15% 以上的蛋白質，是一種潛在的植物蛋白資源[2]。麥麩來源廣泛，價格低廉。目前，我國麥麩的有效利用率很低，麥麩很少進行深加工和再利用，經(jīng)濟價值不高，資源浪費嚴重[3]，將麥麩蛋白酶解而得到生物活性肽不失為進一步開發(fā)麥麩蛋白的途徑。</p><p>　　1.1 麥麩的營養(yǎng)評價</p><p>　　1.1.1 膳食纖維的功能</p><p>

3、;　　小麥麩皮具有抗衰老、抗癌、減肥等重要生理功能，并且已被制成多種流行保健食品[,4,5]，小麥麩皮中起生理功能的最主要的成分是膳食纖維，約含40 %。許多資料表明，由非淀粉多糖組成的膳食纖維到達小腸后，通過減少在小腸的通過時間減少葡萄糖的吸收，減緩淀粉水解，對降低血膽固醇、糖尿病、高血脂、冠心病、高血壓均有良好的促進作用。小麥麩皮還有減少憩室病、膽結石和結腸癌發(fā)生的重要作用[6]。膳食纖維還可顯著增加大鼠糞便正常細菌的含量。腸道中的

4、有益細菌能利用小麥麩膳食纖維產(chǎn)生揮發(fā)性脂肪酸，如乙酸、丁酸等。這些脂肪酸能降低pH ，抑制腐生菌的生長，減少致癌物質的產(chǎn)生[7] 。</p><p>　　在制備小麥麩膳食纖維的過程中，通常采用酶解法除去淀粉、蛋白質，這些酶解液中含有大量的糊精、低聚糖等水溶性物質，可再加以利用。王衛(wèi)東等人將這些酶解液制成風味獨特的麥香茶飲料[8]。利用膳食纖維具有的吸水、吸油、保水、保香等性質，添加到豆醬、豆腐等食品及肉制品中，可

5、以保鮮和防止水的滲透；用于粉狀品時，可作為載體，制成沖劑；加入沙司、蛋黃醬中時可作為粘度調節(jié)劑；加入餅干食品中可使面團易于成型；加入冰棍、糖果等食品，可用作防固結劑[9] 。</p><p>　　1.1.2 低聚糖的功能</p><p>　　麥麩中富含纖維素和半纖維素，是制備低聚糖的良好資源。小麥麩皮中的低聚糖具有系列生物活性[10]。首先，低聚糖具有良好的雙岐桿菌增殖效果，可作為雙歧桿菌

6、生長因子應用于食品。其次，低聚糖具有低熱值性能，屬難消化糖，不被口腔中的產(chǎn)酸類和其他微生物利用，顯示出抗齲齒功能。另外，由于它的低熱值性能，可以作為糖尿病、肥胖病、高血脂等病人理想的糖源。低聚糖還具有表面活性，可吸附腸道中有毒物質及病原菌，提高機體抗病能力，激活免疫系統(tǒng)，用于醫(yī)藥工業(yè)和飼料工業(yè)。</p><p>　　1.1.3多肽作為蛋白質組成的功能</p><p>　　小麥麩皮中含有14

7、.1%的蛋白質，是十分豐富的植物蛋白質資源。植物性來源的蛋白質在膳食補充和食品加工中的地位越來越重要。它不僅可彌補膳食中蛋白質的不足，減少對身體不利的飽和脂肪酸的攝入，還含有一些有生理活性的物質，具有一些非常重要的功能特性。另外，麩皮蛋白質還含有人體必需的多種氨基酸，甚至可與大豆蛋白相媲美[11]。</p><p>　　蛋白質不是僅以氨基酸形式被吸收，而更多的是以肽的形式被吸收。組成有機生物體的20種氨基酸從空間

8、結構上來說比較簡單，但以不同數(shù)目、不同種類的氨基酸結合形成肽就會產(chǎn)生空間結構上較大的差異，這也是肽具有多種生物活性的結構基礎，正因為肽具有多種結構，也就決定了它的多種特殊生理功能。麥麩肽具有人體代謝和生理調節(jié)功能，易消化吸收，有促進免疫、抗菌、抗毒、抗病等諸多作用，且食用安全性極高。</p><p>　　1.2 麥麩多肽的性質</p><p>　　1.2.1麥麩多肽的溶解性</p&g

9、t;<p>　　麥麩多肽在不同的pH值范圍內，其溶解度基本上沒有變化，說明麥麩肽的溶解性不受pH值的影響，具有良好的溶解性[12]。當?shù)鞍妆幻附夂?，蛋白質多聚體解離為小分子的肽，分子由卷曲狀態(tài)成為較伸展的狀態(tài)，增加了分子表面電荷，加強了分子與分子之間、分子與水溶液之間的靜電作用。因此，麥麩多肽的溶解性不受pH值影響。</p><p>　　1.2.2 麥麩多肽的穩(wěn)定性</p><p

10、>　　在pH6.0～8.0 范圍內麥麩多肽比較穩(wěn)定，pH<4.0 及pH>8.0 時，麥麩多肽的穩(wěn)定性下降。隨著加熱溫度的升高麥麩多肽的穩(wěn)定性下降的幅度也增大，在60℃以下的加熱溫度下，其較為穩(wěn)定。丙三醇、蔗糖、乳糖、甘露醇、葡萄糖對麥麩多肽的熱變性有明顯的保護作用，其中丙三醇的保護效果最好。由于它的加入使麥麩多肽在60℃的條件下加熱30 min 后，抗氧化性提高了34.31%。保護劑的濃度為40%時，較為適宜。<

11、;/p><p>　　1.2.3麥麩多肽的安全性</p><p>　　麥麩多肽小鼠急性毒性試驗，LD50 ＞ 20g/kg，屬無毒級。Ames 試驗、骨髓細胞微核試驗、睪丸精母細胞染色體畸變試驗、彗星試驗結果均為陰性。表明麥麩多肽是一種無毒物質，毒性試驗結果初步證明麥麩多肽作為保健食品是安全的。</p><p>　　1.3 麥麩多肽的制備</p><p

12、>　　1.3.1 酶法制備</p><p>　　以麥麩蛋白為原料，用堿性蛋白酶Alcalase 水解麥麩蛋白制備麥麩多肽。劉長江等人采用酶法制備麥麩多肽， 研究了溫度、pH 值、酶用量、及水解時間對麥麩多肽制備率的影響，找出提取的最佳工藝參數(shù)。確定采用堿性蛋白酶Alcalase制備麥麩抗氧化肽的最佳酶解條件為：[E]/[S]=5%、pH8.0、溫度50℃、時間3 h。</p><p>

13、;　　1.3.2 啤酒麥糟制備</p><p>　　該方法是將濕啤酒糟進行干燥、粉碎和過篩，得到啤酒糟；加入麥麩多肽，室溫下攪拌，過濾去渣，離心，得到蛋白提取液；調節(jié)pH4.0~5.0進行沉淀，去上清液，真空冷凍干燥，得到粗多肽；在啤酒糟粗蛋白中加入磷酸氫二鈉－檸檬酸緩沖溶液，調節(jié)pH6.5~8.5；加入Alcalase堿性蛋白酶，加熱至45℃~65℃，在攪拌條件下水解1h~5h；水解完畢之后，于沸水浴滅酶，離心

14、；取離心后的上清液用凝膠柱分離，分別收集各峰后濃縮，冷凍干燥，得到活性麥麩多肽。</p><p>　　1.3.3 酸堿法制備</p><p>　　用化學強酸或強堿催化麥麩蛋白質獲得麥麩多肽，但是此法投資大、占地多、工藝復雜、污染大、分子量難以控制，產(chǎn)品有化學殘留，難以形成功能，很難實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)，至今仍停留在實驗室。</p><p>　　1.4 麥麩多肽的抗氧化性研

15、究</p><p>　　1.4.1 麥麩多肽清除自由基能力</p><p>　　人體自由基應處于平衡中，如果自由基過多或者清除過少，就會對組織產(chǎn)生傷害。麥麩蛋白中蘊涵著許多具有生物活性的氨基酸序列，用特異的蛋白酶水解就有可能釋放出有活性的麥麩多肽。麥麩蛋白抗氧化性肽能抑制機體內自由基的大量積累，對提高自由基清除機制起到一定的功效，從而能在一定程度上消除機體內多種生理功能的障礙，延緩機體的衰

16、老，減少各種老年性疾病的發(fā)生[13]。</p><p>　　1.4.2 麥麩多肽對H2O2誘導的紅細胞氧化溶血的抑制作用</p><p>　　紅細胞中加入H2O2后，紅細胞膜氧化受損，導致溶血現(xiàn)象。純化后的麥麩多肽可明顯抑制氧化溶血現(xiàn)象的發(fā)生。麥麩多肽對H2O2 誘導紅細胞氧化溶血實驗[15]表明麥麩多肽對H2O2誘導紅細胞氧化溶血的抑制作用在3個濃度水平上(15 mg/mL、30 mg/

17、mL、60mg/mL)均達到了顯著水平(P＜0.01)，且表現(xiàn)出一定的劑量-效應關系。說明麥麩多肽能明顯抑制溶血反應的發(fā)生，有效保護紅細胞結構的完整性。</p><p>　　1.5 麥麩多肽前景展望</p><p>　　迄今為止，我國對麥麩的綜合利用的總體水平處在初級開發(fā)階段，尚未能躍上一個新臺階，寶貴的麥麩資源未能得到充分、合理、有效的利用。鑒于麩皮含有豐富的淀粉、蛋白質、粗纖維等，對麥

18、麩進行深加工，提取其中的有效成分，研究開發(fā)一些高附加值的麩皮產(chǎn)品，突破其單一的用途，將產(chǎn)生很高的經(jīng)濟效益和社會效益。因此酶解麥麩蛋白不失為國內麥麩蛋白資源開發(fā)利用的重要途徑之一，經(jīng)SephadexG-25、DEAE-32 纖維素純化后的麥麩多肽能減少紅細胞溶血，減輕肝臟線粒體膨脹程度，說明麥麩多肽具有較強的抗氧化功能?？梢姡滬煻嚯木哂袕V闊的開發(fā)前景。通過本研究，為麥麩多肽的工業(yè)化生產(chǎn)提供理論依據(jù)和工藝參數(shù)，從而為使麥麩多肽更加廣泛的應

19、用于保健品和功能食品領域提供理論基礎與實驗依據(jù)，但其體內抗氧化活性和抗氧化作用機理有待于進一步研究。</p><p>　　1.6 課題研究的目的和主要內容</p><p>　　近年來已有研究證實，在胃腸中肽比氨基酸更易被機體吸收利用。人體可能主要是以肽的形式來吸收氨基酸[15]。目前已發(fā)現(xiàn)許多具有特殊生理功能的食品蛋白源多肽，如抗氧化肽、降血壓肽、降血脂肽、降膽固醇肽、抗菌活性肽、免疫調節(jié)

20、肽等。麥麩蛋白來源廣泛，價格低廉，是一種優(yōu)質的植物蛋白。現(xiàn)有的研究發(fā)現(xiàn)，從麥麩蛋白的酶解產(chǎn)物中能夠分離出多種具有生理功能的多肽、。麥麩多肽是一種非常優(yōu)質的功能性食品原料。</p><p>　　本研究以麥麩為原料，采用生物調控技術孵育麥麩，激活麥麩中內源蛋白酶，以此降解麥麩蛋白，產(chǎn)生并富集多肽，并對麥麩多肽的抗氧化性進行測定。通過本研究，為麥麩多肽的工業(yè)化生產(chǎn)提供理論依據(jù)和工藝參數(shù)，從而為使麥麩多肽更加廣泛的應用于

21、保健品和功能食品領域提供理論基礎與實驗依據(jù)。</p><p><b>　?。?材料和方法</b></p><p>　　2.1實驗材料與設備</p><p><b>　　2.1.1 材料</b></p><p>　　麥麩：市售（在－20℃保藏備用）。</p><p>　　2.1

22、.2 實驗試劑</p><p>　　2.1.3 實驗儀器與設備</p><p><b>　　2.2 實驗方法</b></p><p>　　2.2.1 麥麩處理方法</p><p>　　稱取2g麥麩置于離心管中，加入20mL的孵育液，于一定溫度下孵育一段時間后取出離心，測定上清液的多肽含量。</p><

23、;p>　　2.2.2 緩沖液種類和濃度對麥麩多肽富集的影響</p><p>　　在一定的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間下，采用醋酸緩沖液與檸檬酸緩沖液作為培養(yǎng)液，培養(yǎng)后進行多肽含量的測定，得到最適于多肽富集的緩沖液。</p><p>　　將得到的最適緩沖液在相同的pH條件下，分別在緩沖液濃度為0.01 mol/L，0.05 mol/L，0.1 mol/L和0.2 mol/L下進行多肽的測定，選取

24、適合麥麩多肽富集的最適緩沖液濃度。</p><p>　　2.2.3 麥麩多肽的富集工藝的單因素實驗</p><p>　　以多肽含量為考察指標，對孵育時間、孵育溫度、孵育液pH 值及液料比進行單因素試驗。</p><p>　　在pH3，液料比10：1，培養(yǎng)時間為6h的條件下，研究培養(yǎng)溫度對麥麩多肽富集的影響，設4個處理，培養(yǎng)溫度分別為45℃、50℃、55℃及60℃。&

25、lt;/p><p>　　在pH3，液料比10：1，培養(yǎng)溫度55℃的條件下，研究培養(yǎng)時間對麥麩多肽富集的影響，設4個處理，培養(yǎng)時間分別為2h、4h、6h及8h。</p><p>　　在液料比10：1，培養(yǎng)溫度55℃，培養(yǎng)時間為6h的條件下，研究培養(yǎng)液pH對麥麩多肽富集的影響，設4個處理，pH分別為3.0、4.0、5.0及6.0。</p><p>　　在pH3，培養(yǎng)溫度55

26、℃，培養(yǎng)時間為6h的條件下，研究液料比對麥麩多肽富集的影響，設4個液料比，分別為4:1、6:1、8:1、10:1(mL/g)</p><p>　　2.2.4 響應面法優(yōu)化麥麩多肽培養(yǎng)條件</p><p>　　在單因素試驗的基礎上，選取培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)液pH和料液比三個對麥麩多肽富集效果影響顯著的因素，采用三因素三水平的響應面分析方法，確定最適的培養(yǎng)條件。試驗因素與水平設計見表1。</

27、p><p><b>　　表1 因素水平表</b></p><p>　　采用Design-Expert 統(tǒng)計軟件包對響應面試驗數(shù)據(jù)進行線性回歸和方差分析，優(yōu)化出最適條件組合。</p><p>　　2.2.5 多肽含量的測定</p><p>　　量取1mL 麥麩孵育液于10mL 離心管中，加入4mL PBS 緩沖液(pH7.0

28、、0.2mol/L)，靜置提取1h后10000r/min離心15min，上清液中加入等體積10g/100mL三氯乙酸(TCA)溶液，旋渦混合后靜置30min，10000r/min 離心15min 以沉淀大分子蛋白質。取3mL的上清液，加入2mL的雙縮脲試劑，室溫放置10 min，再10000 r/min離心15 min，以還原型谷胱甘肽作為標準，通過測定上清液的A540來計算多肽含量[16]。</p><p>　

29、　2.2.6 多肽抗氧化性的測定</p><p>　　2.2.6.1麥麩多肽預處理</p><p>　　本實驗采用響應面優(yōu)化組的方案孵育麥麩，用得到的麥麩多肽孵育液先經(jīng)旋轉蒸發(fā)儀濃縮到一定體積，再進行冷凍干燥，得到的多肽粉用無水乙醇配制成濃度分別為0.15g/mL，0.20 g/mL，0.25 g/mL，.0.30 g/mL，0.35 g/mL的醇提液做麥麩多肽的抗氧化性實驗，并與相同濃度

30、的具有顯著抗氧化效果的Vc進行比較。</p><p>　　2.2.6.2 清除羥自由基能力</p><p>　　取1 mL 0.75 mmol/L鄰二氮菲溶液于試管中,依次加入0.2 mmol/L PBS 2 mL和蒸餾水1 mL,混勻后,加入0.75 mmol/L硫酸亞鐵水溶液1 mL,混勻后加入0.01 %過氧化氫水溶液1 mL,于37 ℃恒溫水浴中反應60 min后,在536 nm

31、處快速測定其吸光值,所得數(shù)據(jù)為損傷管的吸光值（A損）,未損傷管以1 mL蒸餾水代替損傷管中1 mL 0.01%過氧化氫,操作方法同上,得未損傷管吸光值（A未）。樣品管以1 mL多肽醇提液代替損傷管中的1 mL蒸餾水,操作方法同上,得樣品管吸光值（A樣）。按下式計算樣品對羥自由基(·OH)的清除率：</p><p>　　·OH清除率（%）=(A樣－A損)/(A未－A損)×100。 &l

32、t;/p><p>　　2..2.6.3 清除DPPH·自由基活力</p><p>　　配制溶液濃度為1.0×10-4 mol/L DPPH·無水乙醇溶液,避光保存。取2mL麥麩多肽醇提液至2mL DPPH·溶液中,搖勻后靜置30 min,以無水乙醇作參比溶液,于517 nm處比色,該值為A1,同時測定2 mL無水乙醇與2 mL DPPH·溶液的

33、吸光值A2,2 mL醇提液與2 mL無水乙醇的吸光值為A0,按下式計算DPPH·自由基的抑制率：</p><p>　　抑制率（%）= [1－（A1－A0）/A2]×100</p><p><b>　　3 結果與分析</b></p><p>　　3.1 緩沖液類型對麥麩多肽富集的影響</p><p>

34、;　　不同緩沖液對麥麩多肽含量的影響見圖1。兩種緩沖液對麥麩多肽的含量均呈現(xiàn)先增長后基本保持穩(wěn)定的趨勢。培養(yǎng)6h 時，檸檬酸緩沖液和醋酸緩沖液處理的麥麩所得到的多肽含量分別比孵育前增長2.14和1.98倍。就兩種緩沖液而言，孵育時間小于4h時，兩種緩沖液孵育的麥麩中多肽含量沒有顯著差異(P<0.05)；在4h-8h之間兩者差異顯著，檸檬酸緩沖液培養(yǎng)的麥麩多肽含量高于醋酸緩沖液培養(yǎng)的。</p><p>　　從

35、圖1中也可以看出，兩種緩沖液孵育麥麩6h時的麥麩中多肽含量最大，這說明，6 h是最適孵育時間。</p><p>　　3.2 緩沖液濃度對麥麩多肽富集的影響</p><p>　　檸檬酸緩沖液濃度對麥麩多肽富集的影響見圖2。由圖2可見，檸檬酸緩沖液濃度為0.1 mol/L時，麥麩多肽含量最高。因此，本研究選擇0.1 mol/L檸檬酸緩沖液作為培養(yǎng)液。</p><p>

36、　　3.3 單因素試驗結果</p><p>　　3.3.1 培養(yǎng)溫度對麥麩多肽富集的影響</p><p>　　在pH3，液料比10：1，培養(yǎng)時間為6h的條件下，研究培養(yǎng)溫度對麥麩多肽富集的影響，實驗結果如圖3所示。由圖3可知，隨著培養(yǎng)溫度的升高，麥麩多肽的含量值逐漸增大，在55℃時達到最高值（35.7mg/g），隨后降低。</p><p>　　3.3.2 培養(yǎng)

37、液pH對麥麩多肽富集的影響</p><p>　　在培養(yǎng)時間6h，液料比10：1，培養(yǎng)溫度55℃的條件下，研究培養(yǎng)液pH對麥麩多肽富集的影響，實驗結果如圖4所示。由圖4可知，隨著pH值的升高，麥麩多肽的含量逐漸增加，在pH4時達到最高值32.7 mg/g，之后麥麩多肽含量緩慢降低，趨于平衡。</p><p>　　3.3.3培養(yǎng)時間對麥麩多肽富集的影響</p><p>

38、　　在液料比10：1，培養(yǎng)溫度55℃，pH3的條件下，研究培養(yǎng)時間對麥麩多肽富集的影響，實驗結果如圖5所示。由圖5可知，麥麩多肽的含量在2-4h間變化不大，4h后含量增加，6h時達到最高值27.2 mg/g，隨后下降。因此，培養(yǎng)6h是麥麩富集多肽的良好時間。</p><p>　　3.3.4液料比對麥麩多肽富集的影響</p><p>　　在pH3，培養(yǎng)溫度55℃，培養(yǎng)時間為6h的條件下，研究

39、液料比對麥麩多肽富集的影響，實驗結果如圖6所示。由圖6可知，隨著液料比的升高，麥麩多肽的含量先增加后減少，在液料比為8時達到最高值35.3(mg/g)。</p><p>　　3.4 響應面優(yōu)化麥麩多肽富集條件的研究</p><p>　　3.4.1 試驗設計與結果</p><p>　　表2 實驗設計與實驗結果表</p><p>　　響應面試

40、驗設計與結果見表2，所做的17組試驗中所得到的麥麩多肽含量最大的條件是：培養(yǎng)溫度55℃、培養(yǎng)液pH 4.0、液料比8:1；得到的麥麩多肽含量最小的條件是：培養(yǎng)溫度50℃、培養(yǎng)液pH 3.0、液料比8:1。</p><p>　　3.4.2 回歸方程的建立及統(tǒng)計分析</p><p>　　用方差分析的F檢驗對回歸模型進行統(tǒng)計分析，結果列于表3，相關系數(shù)R2（0.9868）與調整的相關系數(shù)Adj

41、-R2（0.9699）都接近1，說明實際測定值與預測值之間有極高的擬合度。模型的F值為58.35，表明失擬概率低，顯著性分析得P<0.0001，說明本實驗所得的回歸模型對麥麩多肽富集的量有很好的預測性。模型顯示X1X2，X1X3，X2X3極顯著（P﹤0.001），X1，X3，X12高度顯著（P﹤0.01），X2顯著（P﹤0.05）。</p><p>　　以麥麩多肽的含量為響應值，經(jīng)回歸擬合后，各因子對響應值

42、的影響可用下面回歸方程表示：</p><p>　　Y=-594.76779+11.94048X1+35.54110X2+55.56511X3-0.21403X1X2+ 0.095120X1X3-0.11892X2X3-0.10606 X12-2.77051X22-3.72176X32</p><p>　　表3 回歸方程各項方差分析</p><p>　　R2=0.98

43、68 Adj-R2=0.9699 Pred R2=0.8251 Adeq Precision=19.353</p><p>　　注：***，差異極顯著（P﹤0.001）；**，差異高度顯著（P﹤0.01）；*，差異顯著（P﹤0.05）。 </p><p>　　3.4.3 培養(yǎng)時間、培養(yǎng)液pH和液料比對麥麩多肽含量的影響</p><p>　　培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)液p

44、H和液料比與麥麩多肽含量之間的關系的響應面圖見圖7～9。</p><p>　　為了更直觀得表現(xiàn)兩個因素同時對響應值的影響，可令其他因素水平值為零，僅考慮這兩個因素對響應值的影響，即進行降維分析。得到的二元二次方程可以繪出相應的響應面圖和等高線圖。從響應面圖分析可知，培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)液pH和液料比對麥麩多肽的含量的影響為隨著因素的增大，響應值增大，當響應值達到極值以后，隨著因素的增大，響應值逐漸減小。該模型有穩(wěn)定點，

45、且穩(wěn)定點是最大值。</p><p>　　圖7 培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)液pH交互作用的響應面圖</p><p>　　圖7表示了液料比為8:1時，培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)液pH對麥麩多肽含量的影響。從圖中可知，肽含量的變化隨培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)液pH的變化呈現(xiàn)出較大波動，其總體表現(xiàn)為曲線形效應。根據(jù)方差分析的結果可知這兩個組分之間存在顯著交互作用（P<0.05）。當培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)液pH取值較低時，肽含量隨著二者

46、濃度的提高而提高，但當培養(yǎng)溫度大于55℃，培養(yǎng)液pH大于4時，肽含量反而下降。</p><p>　　圖8表示了培養(yǎng)液pH為4時，培養(yǎng)溫度和液料比對麥麩多肽含量的影響。從圖中可知，培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)液pH的交互作用顯著（P<0.05），當培養(yǎng)溫度和液料比為55℃和8:1時，麥麩多肽含量達到峰值。培養(yǎng)溫度和液料比與多肽含量變化關系都是先增大后減小，當培養(yǎng)溫度大于55℃，液料比大于8:1時，多肽含量開始下降。. &l

47、t;/p><p>　　圖8 培養(yǎng)溫度和液料比交互作用的響應面圖</p><p>　　圖9 培養(yǎng)液pH和液料比交互作用的響應面圖</p><p>　　圖9表示了培養(yǎng)溫度為55℃時，培養(yǎng)液pH和液料比對麥麩多肽含量的影響。從圖中可知，隨著培養(yǎng)液pH和料液比的增加，麥麩多肽含量先增加后降低，在培養(yǎng)液pH和液料比趨于中間值時多肽含量最高。響應曲面坡度較陡峭，表明麥麩多肽含量對于

48、培養(yǎng)液pH和液料比的改變較敏感。交互作用顯著（P<0.05）。</p><p>　　通過響應面的優(yōu)化預測，得到麥麩的最佳培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度為55.8℃，培養(yǎng)液pH 4.09和液料比8.11:1。</p><p>　　3.4.4 模型驗證</p><p>　　通過擬合回歸方程可以得到，最適的培養(yǎng)溫度為55.8℃、培養(yǎng)液pH4.09、液料比8.11:1，麥麩中

49、多肽含量的預測值為36.60mg/g。經(jīng)驗證，以最適條件培養(yǎng)得到麥麩中多肽含量僅僅比預測值低0.61%（36.38 mg/g）。預測值和實際值之間存在較高的擬合度，說明所建立的模型是可靠的；以最適的條件培養(yǎng)麥麩所得到的麥麩多肽含量是原料（15.23 mg/g）的2.39倍，說明優(yōu)化后的培養(yǎng)液能顯著提高麥麩中的多肽含量。</p><p>　　表4 驗證性試驗結果</p><p>　　3.5

50、麥麩多肽抗氧化性的研究</p><p>　　3.5.1 清除羥自由基能力的變化</p><p>　　羥自由基(·OH)是一種氧化能力很強的自由基，有實驗研究表明它是造成生物組織脂質過氧化、核酸斷裂、蛋白質和多糖分解的重要活性氧，在人體衰老方面起著特殊的作用，可以導致許多病理變化。鄰二氮菲-Fe2+氧化法主要用于抗氧化研究中檢測離體實驗體系中羥自由基的氧化作用，是一種比色測定方法

51、，特別是對于抗氧化劑的選擇有重要的價值。圖10顯示了不同醇提液濃度下羥自由基(·OH)的清除率，由圖可見隨著醇提液濃度的升高，羥自由基(·OH)的清除率增大。</p><p>　　3.5 2 清除DPPH·自由基活力的變化</p><p>　　DPPH· （1, 1-二苯基-2-苦肼基）是一種穩(wěn)定的以氮為中心的自由基，其乙醇溶液呈紫色，在517 nm

52、 處有最大吸收。添加抗氧化物質后，其將紫色的DPPH·自由基還原成黃色的非自由基DPPH-H形式。當DPPH·溶液中加入自由基清除劑時，其孤電子被配對，吸收消失或減弱，導致溶液顏色變淺，在517 nm處的吸光度變小，其變化程度與自由基清除程度呈線形關系。故該法可以用來表征某種物質對自由基的清除能力，通常用清除率表示。清除率越大，表明該物質清除自由基的能力越強[17]。</p><p>　　通過

53、實驗得到數(shù)據(jù)繪制成圖11。如圖所示，隨著醇提液濃度的增大，DPPH·的抑制率先增大后減小，在0.2g/mL處達到最大DPPH·的抑制率31.2%。查資料知相同濃度下Vc對DPPH·的抑制率為78.4%。</p><p><b>　　結 論</b></p><p>　　通過研究不同條件下麥麩多肽含量的變化，得到麥麩多肽富集的優(yōu)化條件，主要

54、結果如下：</p><p>　　1、 通過比較檸檬酸緩沖液和醋酸緩沖液對麥麩多肽富集的影響，得出檸檬酸緩沖液對麥麩多肽富集的作用最為顯著。通過研究不同濃度檸檬酸緩沖液對麥麩多肽富集的影響，得出0.1 mol/L檸檬酸緩沖液最適于麥麩多肽的富集。</p><p>　　2、 單因素分析培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時間、培養(yǎng)液pH和液料比四種因素對麥麩多肽富集的影響，得出四因素的最佳水平分別為：培養(yǎng)溫度55℃

55、、培養(yǎng)時間6h、培養(yǎng)液pH 4.0、液料比8:1。</p><p>　　3、響應面優(yōu)化得到麥麩多肽富集的最佳培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度55.8℃，培養(yǎng)液pH 4.09和液料比8.11:1，驗證實驗得到在該條件下所培養(yǎng)出的麥麩多肽含量為36.3858 mg/g。</p><p>　　4、0.35g/mL麥麩多肽醇提液液對·OH的清除率為48.7%。相同濃度下Vc對·OH的清除率

56、為99.8%。說明該濃度下麥麩多肽具有一定的清除·OH能力。</p><p>　　5、0.2g/mL麥麩多肽醇提液對DPPH·的抑制率為31.2%。相同濃度下Vc對DPPH·的抑制率為78.4%。說明麥麩多肽液對DPPH·具有一定的的抑制率。</p><p><b>　　致 謝</b></p><p>

57、　　本論文是在導師白青云博士的悉心指導下完成的。導師淵博的專業(yè)知識，嚴謹?shù)闹螌W態(tài)度，精益求精的工作作風，誨人不倦的高尚師德，嚴以律己、寬以待人的崇高風范，樸實無華、平易近人的人格魅力對我影響深遠。不僅使我樹立了遠大的學術目標、掌握了基本的研究方法，還使我明白了許多待人接物與為人處世的道理。本論文從選題到完成，每一步都是在導師的指導下完成的，傾注了導師大量的心血。在此，謹向導師表示崇高的敬意和衷心的感謝！本論文的順利完成，離不開各位老師、

58、同學和朋友的關心和幫助。在此感謝xx老師的指導和幫助；感謝實驗室各位老師的指導和幫助；感謝淮陰工學院的關心、支持和幫助；在這幾年的學習期間，得到各位師兄和師弟妹的關心和幫助，在此表示深深的感謝。沒有他們的幫助和支持是沒有辦法完成我的學位論文的，同窗之間的友誼永遠長存。</p><p><b>　　參考文獻</b></p><p>　　1 龐廣昌，王秋韞，陳慶森．生物活

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