山東沿海潮間帶綠藻形態(tài)及分子鑒定.pdf

1、山東沿海潮間帶有著豐富的藻類資源，這些藻類本身是海洋生物的天然庇護(hù)和攝食場(chǎng)所，同時(shí)它們也是潮間帶生物群落結(jié)構(gòu)中關(guān)鍵的環(huán)節(jié)，在眾多藻類中，有的形態(tài)差異明顯，但可能是不同生活史中的不同階段、有的形態(tài)幾乎無(wú)差別但其基因型卻是有所不同，這對(duì)潮間帶藻類分類工作造成了種種困難，從事潮間帶綠藻的分類鑒定方向的研究較少，故相關(guān)分類學(xué)信息不夠完善，而在綠藻鑒定工作中，石莼屬又因其種間形態(tài)上差別細(xì)微，并加之被證明是近年來(lái)各地頻繁發(fā)生的綠藻自然災(zāi)害的主要物種

2、，所以引起了世界各國(guó)藻類分類學(xué)者更多的關(guān)注。通過(guò)研究相關(guān)藻種的分類地位，精確的鎖定有研究?jī)r(jià)值的藻種，為接下來(lái)的防治與開發(fā)利用等工作奠定了理論依據(jù)。
　　 本研究對(duì)山東地區(qū)的沿海潮間帶逐月進(jìn)行了大型綠藻樣品的采集工作，將采得樣品進(jìn)行形態(tài)學(xué)及分子生物學(xué)的鑒定，分析了樣品之間形態(tài)學(xué)和相關(guān)基因序列的差異，從而確定樣品的分類學(xué)地位，了解青島沿海的主要綠藻藻種的情況，為大規(guī)模綠潮爆發(fā)的機(jī)理提供了理論的借鑒。
　　 首先，研究運(yùn)用形態(tài)

3、學(xué)觀察及普通、冷凍切片技術(shù)對(duì)采集的不同的綠藻樣品的藻體形態(tài)、顏色和質(zhì)地、基部、中部、尖端的形態(tài)、細(xì)胞的排列和大小，葉綠體的在細(xì)胞中的位置等做了細(xì)致的分析，查閱圖鑒及國(guó)內(nèi)外形態(tài)學(xué)研究資料，進(jìn)行形態(tài)學(xué)的分類后鑒定出5屬13種。
　　 然后，本研究運(yùn)用DNA條形碼技術(shù)，選取了tufA(elongation factor Tu)，ITS(internal transcribed spacer)，rbcL(ribulose-1，5-bis

4、phosphate carboxylase large/oxygenase subunit)三個(gè)基因設(shè)計(jì)引物(片段長(zhǎng)度均在800bp左右)對(duì)采集的樣品進(jìn)行PCR擴(kuò)增，根據(jù)測(cè)序結(jié)構(gòu)對(duì)以上三個(gè)基因作為綠藻分類條形碼的可行性做了系統(tǒng)的分析，結(jié)果表明，trfA基因的擴(kuò)增范圍相對(duì)較廣，擴(kuò)增成功率較高，序列分為10個(gè)分枝，分別是Ulva procera(Linza)，Ulva prolifera，Ulva flexuosa，Ulva laetevi

5、rens，Ulva compressa，Ulva australis，Ulva sp，Monostrma sp，Codiumfragile，HQW-20110710-1。而ITS，rbcL則有更高的種屬間特異性。其中ITS為了7枝，7枝所代表的物種分別為Ulva prolifera，Ulva linza，Ulva laetevirens，Ulva australis(Ulva pertusa)，Ulva compressa，Monost

6、roma arcticum，RZ-20111206-4。rbcL序列信息構(gòu)建進(jìn)化樹后分為了7枝。7枝所代表的物種分別為歸在Ulva prolifera，Ulva australis(Ulva pertusa)，Ulva preceral，Ulva precera2，HQW-20110902-4與ZQ-20110403-1、YT-20111205-2，Ulva laetevirens中。
　　 最后，將形態(tài)學(xué)的鑒定結(jié)果與DNA條形