不同處理對半夏懸浮培養(yǎng)細胞有效成分以及相關酶活性的影響.pdf

1、半夏Pinellia ternata(Thunb.)Breit.是天南星科多年生草本植物，以塊莖入藥，是傳統(tǒng)的中藥材，為廣布物種，在我國很多地區(qū)均有種植。半夏含有多種化學成分，蛋白質和生物堿為其藥理作用的主要成分之一。本試驗通過組織培養(yǎng)的方法建立愈傷組織顆粒懸浮培養(yǎng)體系，對半夏懸浮培養(yǎng)細胞進行不同方式的處理，例如高溫脅迫、外源添加茉莉酸甲酯和水楊酸，研究不同方式處理對半夏懸浮細胞中總蛋白質、總生物堿等有效成分及相關酶活性的影響。主要研究

2、結果如下：
　　1.取生長旺盛，葉柄粗壯的無菌半夏試管苗，將其葉柄剪成小段(1-1.5cm)置于誘導培養(yǎng)基中（MS+2.0mgL-1 6-BA+2.0mgL-1 2,4-D+2.0mgL-1 KT+6.5gL-1瓊脂+30gL-1蔗糖，pH6.0），培養(yǎng)20d左右可誘導出大量愈傷組織。
　　2.將愈傷組織繼代培養(yǎng)3-5次，挑取疏松的、生長旺盛的半夏愈傷組織，將其置于液體懸浮培養(yǎng)基中(MS+0.5mgL-1 6-BA+1.0m

3、gL-1 2,4-D+300mgL-1 CH+30gL-1蔗糖，pH6.0)培養(yǎng)，建立穩(wěn)定的半夏懸浮細胞培養(yǎng)體系。將其經低溫同步化（8℃低溫條件下，處理24h，25℃恢復36h）后，轉入搖床培養(yǎng)。
　　3.當半夏懸浮培養(yǎng)細胞培養(yǎng)至生長對數(shù)期(9d)，將其分成兩組，對照組正常培養(yǎng)，試驗組35℃高溫脅迫培養(yǎng)，每隔5 d取材測總蛋白和生物堿含量。分別采用酸性染料比色法和Tris-HCl緩沖液提取法測量半夏細胞中總生物堿和蛋白含量。研究發(fā)

4、現(xiàn)試驗組半夏懸浮培養(yǎng)細胞的干重和總蛋白的含量均明顯低于對照組，說明高溫對半夏懸浮細胞的生長及懸浮細胞中總蛋白的含量均具有抑制作用。在35℃高溫培養(yǎng)的20d中，試驗組生物堿含量大多高于對照組，說明在一定程度范圍內，高溫處理對半夏懸浮細胞中生物堿的含量具有相對的促進作用，且高溫脅迫5d時生物堿含量達到最大值，為139.42μg0.1g-1(干粉)。
　　4.同上面方法一樣，當半夏懸浮培養(yǎng)細胞生長到對數(shù)期（9d）分成兩組，對照組正常培養(yǎng)

5、，同時試驗組分別外源添加50μmolL-1、100μmolL-1、150μmolL-1、200μmolL-1的MeJA，研究發(fā)現(xiàn)外源MeJA對半夏懸浮培養(yǎng)細胞總生物量的積累存在一定的抑制作用，此外，對其生長代謝周期還有相應的延緩作用。試驗組的半夏懸浮培養(yǎng)細胞，外源添加MeJA濃度為150μmolL-1、處理時間為15 d時生物堿和總蛋白含量均達到最高值。
　　5.在半夏懸浮細胞生長的對數(shù)期，分別添加50μmolL-1，100μmo

6、lL-1，150μmolL-1，200μmolL-1 SA至試驗組的半夏懸浮細胞中，每隔5d，取半夏懸浮細胞材料，分別測對照組和試驗組干重、總蛋白及總生物堿含量。研究發(fā)現(xiàn)添加SA的試驗組，濃度為150μmolL-1、處理15d時總蛋白含量最高，但是生物堿含量達到最高的組合為50μmolL-1 SA、處理15d。
　　6.同時對上述添加外源MeJA和SA的半夏懸浮培養(yǎng)細胞中的相關酶的活性進行測定，研究發(fā)現(xiàn)IMP脫氫酶和sAMP合成酶