貢山三尖杉化學(xué)成分及生物活性研究.pdf

1、三尖杉屬(CephalotaxusSieb.etZucc.exEndl)屬于裸子植物(Gymnospermae)三尖杉科(Cephalotaxaceae)。本科僅1屬9種，分布于亞洲東部至南亞次大陸，以我國分布最為集中，有7種3變種。三尖杉屬植物莖皮、枝、葉、根、種子中含有多種抗腫瘤活性較好的生物堿成分，其中三尖杉酯堿(harringtononine)和高三尖杉酯堿(homoharringtononine)對人體非淋巴系統(tǒng)白血病有顯著的

2、療效，為我國首創(chuàng)推薦應(yīng)用于臨床的抗白血病新藥。
　　 迄今，三尖杉屬9種植物，其中8種已經(jīng)有文獻(xiàn)報(bào)道其化學(xué)成分及其活性研究，但貢山三尖杉由于其地理分布局限，物種資源珍貴，國內(nèi)外并無文獻(xiàn)報(bào)道其化學(xué)成分研究，因此本課題組于2010年開始對貢山三尖杉進(jìn)行系統(tǒng)化學(xué)成分研究，豐富該屬的化學(xué)成分及生物活性信息。
　　 貢山三尖杉(CephalotaxuslanceolataK.M.Feng)為裸子植物(Gymnospermae)三尖

3、杉科(Cephalotaxaceae)常綠喬木，生長于我國云南北部貢山縣獨(dú)龍江上游沿岸海拔1900米的闊葉林中，藥用其種子和枝葉，民間用于驅(qū)蟲消積、潤肺止咳，治療白血病、惡性淋巴肉瘤等。
　　 本課題以采自云南省怒江州貢山縣高黎貢山的貢山三尖杉為研究對象，從其中分離得到60個(gè)化合物，運(yùn)用光譜分析技術(shù)UV，IR，EI-MS，ESI-MS，1DNMR，2DNMR等鑒定了其中53個(gè)化合物，生物堿14個(gè)，其中3個(gè)新化合物，1個(gè)新的天然產(chǎn)

4、物；單萜化合物4個(gè)；倍半萜11個(gè)，其中1個(gè)新化合物，2個(gè)新的天然產(chǎn)物；二萜12個(gè)，其中7個(gè)新化合物，黃酮2個(gè)，木脂素2個(gè)，其他類成分8個(gè)，其中1個(gè)新化合物；分別為：
　　 1.貢山三尖杉堿A(1)*
　　 2.貢山三尖杉堿B(2)*
　　 3.貢山三尖杉堿C(3)*
　　 4.貢山三尖杉堿D(4)**
　　 5.三尖杉堿(5)
　　 6.表三尖杉堿(6)
　　 7.Cephalot

5、axineα-N-oxide(7)
　　 8.Cephalotaxineβ-N-oxide(8)
　　 9.氧橋三尖杉堿(9)
　　 10.三尖杉酮堿(10)
　　 11.三尖杉酰胺(11)
　　 12.4-羥基三尖杉堿(12)
　　 13.三尖杉酯堿(13)
　　 14.高三尖杉酯堿(14)
　　 15.(2E)-6-Hydroxy-2，6-dimethylocta-2，

6、7-dienoicacid(15)△
　　 16.6-Hydroxy-2，6-dimethyloct-7-enoicacid(16)△
　　 17.Oleuropeicacid(17)△
　　 18.1，2-Propanediol(18)△
　　 19.9-Hydroxy-4，7-megastigmadien-3-one(19)△
　　 20.貢山三尖杉倍半萜A*
　　 21.Corcho

7、ionolC(21)△
　　 22.9，10-Dihydroxy-4，7-megastigrnadien-3-one(22)△
　　 23.5，12-Epoxy-9-hydroxy-7-megastigmen-3-one(23)△
　　 24.Drummondol(24)△
　　 25.貢山三尖杉倍半萜B**
　　 26.貢山三尖杉倍半萜C**
　　 27.地芰普內(nèi)酯(27)△
　　

8、 28.(3S，5R，8S)-5，8-Epoxy-6-megastigmene-3，9-diol(28)△
　　 29.Clovandiol(29)△
　　 30.貢山三尖杉二萜A(30)*
　　 31.覆瓦南美杉醇(31)△
　　 32.14-Dien-18-oicacid(32)△
　　 33.脫氫樅酸(33)△
　　 34.15-羥基去氫松香酸(34)△
　　 35.貢山三

9、尖杉二萜B(35)*
　　 36.貢山三尖杉二萜C(36)*
　　 37.貢山三尖杉二萜D(37)*
　　 38.貢山三尖杉二萜E(38)*
　　 39.貢山三尖杉二萜F(39)*
　　 40.海南粗榧內(nèi)酯(40)
　　 41.貢山三尖杉內(nèi)酯(41)*
　　 42.Taiwanhomoflavone-B(42)
　　 43.Taiwanhomoflavone-A(43)

10、r>　　 44.(7'S，8'R)-Dihydrodehydrodiconiferylalcohol(44)△
　　 45.異落葉松脂素(45)△
　　 46.Lanceolatol(46)*
　　 47.反式對羥基桂皮酸(47)△
　　 48.JunipediolA(48)
　　 49.JunipedioiB(49)
　　 50.對羥基苯甲酸(50)△
　　 51.4-羥基-3

11、-甲氧基苯甲酸(51)△
　　 52.β-胡蘿卜苷(52)△
　　 53.β-谷甾醇(53)
　　 注：帶*標(biāo)注的為新化合物；帶**標(biāo)注的為新的天然產(chǎn)物；帶△標(biāo)注的為首次從該屬植物中分離得到。
　　 其中1、2、4、20、30、35、36、37、38、39、41、46為12個(gè)新化合物，3、25、26為3個(gè)新的天然產(chǎn)物，15、16、17、18、19、21、22、23、24、25、26、27、28、29、31

12、、32、33、34、44、45、47、50、51、52為該屬植物中首分得的化合物，所有化合物均為該種植物首次分離得到。
　　 藥理活性篩選：依據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道的三尖杉屬生物堿具有顯著的抗腫瘤活性，我們采用四氮唑鹽(Methyl-Thiazol-Tetrozolium，MTT)還原法對貢山三尖杉藥材的總生物堿部位和化合物進(jìn)行了細(xì)胞毒活性的篩選，選用的細(xì)胞株有A549(人肺癌細(xì)胞)、HCT-116(人結(jié)腸癌細(xì)胞)、SK-BR-3(人乳腺癌

13、細(xì)胞)、HepG2(人肝癌細(xì)胞)、HL-60(人白血病細(xì)胞)。結(jié)果顯示：具有細(xì)胞毒性的成分主要是貢山三尖杉中的生物堿成分，新的生物堿對于人白血病細(xì)胞HL-60沒有細(xì)胞毒活性，其中化合物5對HCT116有較弱的細(xì)胞毒活性IC50值為22.65μg/mL，而化合物9對A549有較弱的細(xì)胞毒活性IC50值為28.29μg/mL，對HCT116和HepG2有中等的細(xì)胞毒活性IC50值為2.61和3.95μg/mL，化合物13對A549，HCT1

14、16，HepG2有較強(qiáng)的細(xì)胞毒活性IC50值為0.15，0.054，0.38μg/mL，化合物14對A549，HCT116，HepG2有顯著的細(xì)胞毒活性IC50值為0.085，0.001，0.087μg/mL。以上結(jié)果表明，C-3位連有酯鏈對于三尖杉堿類生物堿的細(xì)胞毒活性有著至關(guān)重要的意義，并且不同的酯鏈對于活性也有一定的影響；N上的孤獨(dú)電子對此類生物堿的活性也扮演了重要角色；另外，C-2和C-11之間連有氧橋有助于提高生物堿的活性；但

15、是此類二聚體生物堿活性不好，即使二聚體結(jié)構(gòu)中含有能提高活性的氧橋也沒有細(xì)胞毒活性。我們采用流式細(xì)胞儀進(jìn)一步研究三尖杉酯類生物堿(13、14)對HCT116細(xì)胞周期的影響，發(fā)現(xiàn)此類化合物對HCT116細(xì)胞的阻滯作用主要體現(xiàn)在S期，因此其抑制細(xì)胞增殖的作用可能與阻滯細(xì)胞周期的S期有關(guān)。同時(shí)，本課題對分離得到二萜化合物進(jìn)行了體外細(xì)胞毒活性篩選，發(fā)現(xiàn)化合物40對A549具有一定的細(xì)胞毒活性，其IC50為12.84μg/mL，對HCT116和He