大豆抗疫病新基因挖掘及鑒定.pdf

1、大豆疫病是大豆的重要病害之一，在世界范圍內(nèi)造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。防治大豆疫病最有效的方法是利用抗病或耐病品種。因此，不斷發(fā)掘和鑒定大豆抗疫病新基因?qū)Ψ乐卧摬『哂兄匾饬x。
　　1.鑒定了野生大豆資源對(duì)大豆疫病的抗病性和耐病性，以期在野生大豆中發(fā)掘優(yōu)異抗源。用苗期子葉貼菌塊方法鑒定104份野生大豆資源對(duì)兩個(gè)不同毒力的大豆疫霉菌株P(guān)SJS2(毒力型:1a，1b，1c，1d，1k，2，3a，3b，3c，4，5，6，7，8)和PS41-1（

2、毒力型:1a，1d，2，3b，3c，4，5，6，7，8）的抗性。結(jié)果表明，33份資源抗PS41-1，35份資源抗PSJS2，其中18份抗兩個(gè)菌株。在抗病性鑒定基礎(chǔ)上，用菌層接種方法對(duì)選擇的82份資源進(jìn)行耐病性鑒定，發(fā)現(xiàn)7份高耐病性資源。這些結(jié)果表明，野生大豆中可能含有新的大豆疫病抗病和（或）耐病資源，這些抗病或耐病資源可以用于未來(lái)大豆抗病育種，以豐富大豆對(duì)大豆疫病的抗性遺傳基礎(chǔ)。
　　2.以抗疫病大豆品種早熟18為父本、感病品種W

3、illiams為母本雜交產(chǎn)生的232個(gè)F2∶3家系為作圖群體，基于早熟18中抗疫病基因RpsZS18初定位結(jié)果，在大豆基因組目標(biāo)基因區(qū)域內(nèi)開(kāi)發(fā)SSR標(biāo)記對(duì)RpsZS18進(jìn)行精細(xì)作圖，最終將RpsZS18定位于大豆2號(hào)染色體上SSR標(biāo)記ZCSSR33(0.5 cM)和ZCSSR46(0.9 cM)之間，標(biāo)記Satt172與RpsZS18共分離。標(biāo)記ZCSSR33和ZCSSR46在2號(hào)染色體上的物理距離為112.6 kb，在該區(qū)域內(nèi)進(jìn)行候選

4、基因分析，發(fā)現(xiàn)基因模型Glyma.02g246000是具有典型抗病基因結(jié)構(gòu)的Ser/Thr蛋白激酶結(jié)構(gòu)類(lèi)型，確定其為候選基因。通過(guò)序列結(jié)構(gòu)分析，發(fā)現(xiàn)早熟18和Williams候選基因位點(diǎn)在DNA和cDNA上存在著多個(gè)SNP位點(diǎn)基于候選基因序列差異開(kāi)發(fā)一個(gè)Indel標(biāo)記ZCIndelzs18，并進(jìn)行群體驗(yàn)證，證明ZCIndelzs18與RpsZS18分離。兩個(gè)共分離標(biāo)記的開(kāi)發(fā)為RpsZS18分子輔助選擇育種提供有效的工具。
　　3.

5、將早熟18及其具有親緣關(guān)系的25個(gè)大豆品種分別接種8個(gè)不同毒力的大豆疫霉菌株，獲得不同品種的抗性反應(yīng)型，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)與早熟18具有相同反應(yīng)型的大豆品種。對(duì)不同品種的RpsZS18候選基因位點(diǎn)進(jìn)行測(cè)序分析，發(fā)現(xiàn)該區(qū)域存在豐富的多樣性，但編碼區(qū)序列相對(duì)保守，共存在13個(gè)單倍型。用于開(kāi)發(fā)Indel標(biāo)記的缺失在抗病和感病品種中都有出現(xiàn)，不是有效的功能突變位點(diǎn)，位于早熟18中候選基因C-末端存在8個(gè)集中的SNP以及一個(gè)堿基的插入，造成蛋白質(zhì)C-端第4