水溶性多色量子點(diǎn)的合成及其作為納米熒光探針在蛋品安全檢測(cè)方面的應(yīng)用研究.pdf

1、禽蛋作為最具營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的健康食品之一，在人類膳食結(jié)構(gòu)中占有舉足輕重的地位。禽蛋的微生物污染問題，尤其因禽蛋表面致病菌引發(fā)的食源性疾病事件一直是全世界關(guān)注的熱點(diǎn)問題，所以急需快速、靈敏、安全、經(jīng)濟(jì)的分析檢測(cè)技術(shù)以保障禽蛋的質(zhì)量安全。利用量子點(diǎn)作為多色納米探針，結(jié)合免疫分析的熒光分光光度法，具有檢測(cè)速度快、靈敏度高、抗干擾強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，在生物學(xué)標(biāo)記、化學(xué)檢測(cè)、分子生物學(xué)等領(lǐng)域凸顯出了優(yōu)越的應(yīng)用前景。本文查閱大量文獻(xiàn)，改進(jìn)了目前水相合成量子點(diǎn)的方法

2、，以制備的量子點(diǎn)作為免疫熒光探針，建立食源性菌的分析檢測(cè)方法，并初步應(yīng)用于禽蛋以及其他食品安全檢測(cè)中，以期為保障食品安全、檢測(cè)食源性致病菌的研究提供思路。
　　1、采用兩步加堿法制備高質(zhì)量水溶性CdTe/Cd(OH)2核殼結(jié)構(gòu)量子點(diǎn)，通過(guò)控制堿液濃度和水浴時(shí)間控制量子點(diǎn)的尺寸大小、提高量子點(diǎn)的量子產(chǎn)率和穩(wěn)定性，縮短合成時(shí)間。第一次加NaOH目的是提高量子點(diǎn)量子產(chǎn)率(2h內(nèi)量子產(chǎn)率可達(dá)到83％)。第二次加NaOH目的是短時(shí)間內(nèi)得到熒

3、光發(fā)射波長(zhǎng)范圍廣(504nm到605nm)的量子點(diǎn)。相比于傳統(tǒng)的近紅外量子點(diǎn)加熱回流法，第二次加堿不僅極大地減少了時(shí)間成本，更使大尺寸的量子點(diǎn)維持著相對(duì)高的量子產(chǎn)率。實(shí)驗(yàn)采用透射電子顯微鏡、高分辨透射電子顯微鏡、X射線粉末衍射、紫外-可見分光光度法、熒光分光光度法等分析檢測(cè)手段，對(duì)制備的量子點(diǎn)進(jìn)行表征。結(jié)果表明，通過(guò)兩步加堿合成的量子點(diǎn)熒光發(fā)射波長(zhǎng)范圍廣，性質(zhì)穩(wěn)定，放置三個(gè)月后熒光強(qiáng)度基本不變。這些優(yōu)良的光化學(xué)特性將有利于其在分析檢測(cè)領(lǐng)

4、域發(fā)揮作用。
　　2、基于量子點(diǎn)熒光標(biāo)記的靈敏性以及免疫反應(yīng)的專一性，對(duì)量子點(diǎn)進(jìn)行抗體免疫，制備出具有特異性的量子點(diǎn)免疫熒光探針，從而建立快速靈敏檢測(cè)禽蛋表面的腸炎沙門氏菌的方法。實(shí)驗(yàn)在最佳檢測(cè)條件下，檢測(cè)到的腸炎沙門氏菌的線性范圍寬(102-107CFU/mL)，相關(guān)系數(shù)高(R2=0.9958)，最低檢測(cè)限為102CFU/mL，體現(xiàn)出來(lái)良好的選擇性及靈敏度。實(shí)驗(yàn)將本方法應(yīng)用在鮮雞蛋、盒裝雞蛋以及保潔蛋的蛋殼表面沙門氏菌的檢測(cè)，并

5、以國(guó)標(biāo)法做參照，顯示出了高度的準(zhǔn)確性、可靠性和可行性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明鮮雞蛋表面最容易感染沙門氏菌，具有極大的安全隱患，而盒裝雞蛋以及保潔蛋經(jīng)過(guò)清洗殺菌等處理后，蛋殼表面的致病菌大大減少。
　　3、篩選出三種不同發(fā)射波長(zhǎng)的、光譜獨(dú)立的多色量子點(diǎn)(發(fā)射波長(zhǎng)為504nm，557nm和604nm)分別與腸炎沙門氏菌、金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的抗體偶聯(lián)，得到三種免疫熒光探針，基于抗體與菌體之間的特異性結(jié)合而引發(fā)的熒光信號(hào)的改變，實(shí)現(xiàn)快速同步檢

6、測(cè)三種食源性菌。三種菌的檢測(cè)線性范圍分別為腸炎沙門氏菌3.21×102-4.81×106CFU/mL，金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的線性范圍分別為3.42×102-5.13×106CFU/mL和2.03×102-3.04×106CFU/mL。三種檢測(cè)方法的相關(guān)系數(shù)均大于0.9，最低檢測(cè)限達(dá)到102CFU/mL，相比于其他同類的檢測(cè)方法，本方法最低檢測(cè)限低1到2個(gè)數(shù)量級(jí)。實(shí)驗(yàn)將此方法應(yīng)用于9種食品樣品的檢測(cè)，結(jié)果顯示，本方法具有很強(qiáng)的抗干擾能

7、力，在復(fù)雜的食品基質(zhì)的影響下能呈現(xiàn)良好的檢測(cè)結(jié)果。
　　4、量子點(diǎn)優(yōu)異的光學(xué)特性不僅體現(xiàn)在多色同步檢測(cè)的應(yīng)用上，還可與新的技術(shù)如熒光共振能量轉(zhuǎn)移相結(jié)合，實(shí)現(xiàn)更靈敏更高效的檢測(cè)。本章以腸炎沙門氏菌免疫后的綠色量子點(diǎn)作為能量供體，腸炎沙門氏菌抗體的二抗免疫的橙色量子點(diǎn)作為能量受體，建立了熒光能量共振轉(zhuǎn)移體系，并用于超靈敏檢測(cè)禽蛋表面沙門氏菌。當(dāng)沙門氏菌濃度在75-5.01×105CFU/mL時(shí)，能量受體的熒光強(qiáng)度隨著菌數(shù)的增多而規(guī)律性