柑桔抗Alternaria alternata遺傳分析及QTL定位.pdf

1、由交鏈格孢菌(Alternaria alternata)引起的柑桔褐斑病是一種可同時危害柑桔嫩葉、嫩梢及幼果的病害。近幾年在我國各大柑桔產(chǎn)區(qū)均有發(fā)生，且發(fā)病面積不斷擴大，導致柑桔的產(chǎn)量和品質(zhì)下降，造成嚴重的經(jīng)濟損失。
　　目前，國內(nèi)不同柑桔品種對褐斑病的抗性未見相關(guān)報道，與之相關(guān)的抗褐斑病基因認知不足，且缺乏快速穩(wěn)定的致病力評價體系，進而影響病害的防治研究和實踐。建立穩(wěn)定的致病力評價體系，篩選出抗柑桔褐斑病品種，為生產(chǎn)防治和挑選經(jīng)

2、濟適用品種提供參考;定位相關(guān)的抗性基因，從育種上根本解決這一問題成為當務之急。
　　本研究采用室內(nèi)接菌餅的方法建立一個快速穩(wěn)定、操作簡便的菌株致病力評價體系。并應用該體系對重慶4大主栽品種中的54個不同柑桔品種進行抗病性分析，采用不同評價方法進行抗性等級劃分，明確不同柑桔品種對褐斑病的抗性。另外，以實驗室已建立的柑桔分子標記遺傳圖譜為基礎(chǔ)，利用“梨橙2號×晚蜜2號”及所得到的68株F1代為材料，以嚴重度（病斑直徑大?。┖桶l(fā)病率為指

3、標，通過QTL定位到相應的標記位點。采用qPCR對部分標記基因進行分析。主要研究結(jié)果如下:
　　(1)從萬州紅桔上采集柑桔褐斑病受害樣本，在室內(nèi)進行分離純化和鑒定。研究發(fā)現(xiàn)菌落、菌絲、分生孢子形態(tài)特征與鏈格孢菌相似;接種致病產(chǎn)生黃色暈圈;以ITS1和ITS4為引物，擴增得到532bp的ITS區(qū)DNA片段。將測序結(jié)果登錄GenBank進行BLAST比較，與A.alternata的相似性達到99％，以PG2和PG3(endoPG)區(qū)系

4、列引物擴增序列構(gòu)建進化樹發(fā)現(xiàn)分離株與A.alternata聚為一枝。
　　(2)首次在“溫州蜜柑”離體葉片和果實上造成不同傷口處理，接種強致病菌株A.alternata HJX，25℃保濕培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)葉片不接菌對照有、無傷口均不發(fā)病;其余各種傷口處理均發(fā)病，不同傷口類型對病害影響很大。葉片反面較正面更易于發(fā)病，反面10針、1針及無傷接種發(fā)病無明顯差異;果實表面1針、10針及去除果皮對發(fā)病影響達到極顯著水平。用6個不同柑桔品種及Alt

5、ernaria cirri ZYF，Alternaria sp.MP32個菌株驗證方法的穩(wěn)定性及可靠性，發(fā)現(xiàn)菌株HJX在不同品種上致病力存在差異，2個菌株之間的致病力也存在差異。建議以離體柑桔葉片或果實為材料，葉片反面1針接種或果實去皮接種，25℃保濕培養(yǎng)2d后調(diào)查病斑大小，作為室內(nèi)準確、快速評價柑桔褐斑病致病力的方法。
　　(3)評價54個柑桔品種對褐斑病菌的感病程度及抗性分級標準。采用室內(nèi)人工接種觀察不同品種的感病程度并根據(jù)系

6、統(tǒng)聚類法、平均直徑法、病情指數(shù)法3種不同抗性評價方法來探討54個柑桔品種對柑桔褐斑病菌的抗性。結(jié)果表明:參試的種質(zhì)資源共分為高抗、抗病、中抗、感病、高感五類，未發(fā)現(xiàn)免疫種質(zhì);胡柚、強德勒、華盛頓臍橙和梁平柚4個品種為高抗品種;大多數(shù)寬皮柑類品種易感病。本研究本研究為指導田間栽培和抗柑桔褐斑病菌育種提供理論依據(jù)。
　　(4)利用“梨橙2號×晚蜜2號”及衍生的68個LW重組自交系為材料，采用室內(nèi)離體葉片接菌餅的方法，對其進行抗病性分析

7、。并在已構(gòu)建的含有334個SSR標記，9個連鎖群，總長844.2cM，平均圖距2.53cM的分子遺傳圖譜基礎(chǔ)上，運用Map QTL5.0分析軟件，采用區(qū)間作圖(Interval Mapping)進行QTL初步檢測，再利用多重區(qū)間作圖法(MQM)進行優(yōu)化，共檢測到18個與柑桔識別抗性相關(guān)的標記，分布在LW2和LW3上，其中在LW2上檢測到11個QTL位點，名為qlt2.1、qlt2.2、qlt2.3、qlt2.4、qlt2.5、qlt2.

8、6、qlt2.7、qlt2.8、qlt2.9、qlt2.10、qlt2.11，貢獻率分別為23.9％、23.2％、21.2％、20.4％、20.4％、20.2％、17.8％、17.8％、17.4％、17.3％、15.8％;LW3上檢測到7個QTL位點，名為qlt3.1、qlt3.2、qlt3.2、qlt3.4、qlt3.5、qlt3.6、qlt3.7貢獻率分別為25％、18.4％、18.2％、17.9％、16.7％、16.6％、16.4

9、％。共檢測到8個與柑桔防御抗性相關(guān)的QTL位點，其中在LW1上檢測到2個位點，名為qlty1.1、qlty1.2，貢獻率分別為18.2％和15.8％; LW2上為qlty2.1和qlty2.2，貢獻率都為17％，qlty2.3貢獻率為16.3％; LW3上是qlty3.1、qlty3.2貢獻率分別為18.2％和17.4％; LW6上為qlty6.1貢獻率為17.5％。合理利用與這些位點緊密連鎖的固定標記cBSSR835E2、CMS30、

10、Hcx4040、cSSR340、F13、cSSR202、 F23、cSSR309、cBDM83E1、cBMM74、cSSR128、cSSR27、cSSR32、HCX6020、CMS14、Hcx6026、F88、LcSSR115對應的EST編碼序列可促進抗柑桔褐斑病的分子標記輔助育種的發(fā)展。
　　(5)選用中抗品種不知火葉片接種HJX對QTL標記LcSSR115、HCX6020、cSSR309、cSSR202、F88、cSSR340