Alternaria alternata菌絲細胞壁凝集素的分離純化及特性研究.pdf

1、山東農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文Alternaria alternata菌絲細胞壁凝集素的分離純化及特性研究姓名：張成省申請學位級別：碩士專業(yè)：植物病理學指導教師：李多川2002.6.1山東農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文摘要在各種不同的生命現(xiàn)象中，識別是中心事件，也是許多基于細胞間互作的生命進程中的第一步。真菌細胞壁作為細胞的最外層部分，調(diào)節(jié)著真菌( 包括菌寄生真菌或寄主真菌) 與周圍環(huán)境最初的物理化學相互作用，細胞壁結(jié)合蛋白質(zhì)在這些過程中扮演著重要角色

2、，細胞壁蛋白質(zhì)的研究成為生物間相互識別機制研究的熱點。菌寄生是菌寄生真菌與寄主真菌問的一種寄生方式，結(jié)合于寄主真菌菌絲細胞壁上的特異性蛋白一凝集素被認為是菌寄生過程中的重要識別因子。纖細齒梗孢O l p i t r i c h u mt e n e l l u m 系接觸性活體營養(yǎng)菌寄生真菌，寄主之一是A l t e r n a r i aa l t e r n a t a ，關(guān)于這一類菌寄生真菌與寄主真菌間的識別機制研究國內(nèi)外尚未見報

3、道。本研究選擇二者作為研究系統(tǒng)，分離純化了寄主細胞表面的特異性蛋白質(zhì)凝集素，對其在菌寄生過程中的作用作了初步探討，為進一步研究菌寄生過程中的信號傳遞奠定基礎，為闡明生物問的相互作用機理提供一定證據(jù)；同時對真菌菌絲細胞壁可溶性蛋白的分離方法也作了研究，為真菌菌絲細胞壁研究提供方法參考和實驗依據(jù)。＼結(jié)果如下：1 ． 以A ．a(chǎn) l t e r n a t a 為研究材料，分別用三種不同的化學方法，對真菌菌絲細胞壁蛋白質(zhì)的抽提方法進行了比較和

4、研究。結(jié)果表明依次經(jīng)過液氮研磨、超聲波細胞粉碎機和細胞勻漿混合器處理，可使細胞壁破碎率≥9 9 ％，在一定條件下( 1 2 0 0 9 ，2 m i n ) 離心即可制備較純的細胞壁，純度約9 5 ％。將分離到的細胞壁分別用三種不同的化學方法即堿抽提( 常溫) 、熱堿抽提和s D s 抽提，并對抽提液的蛋白含量及組分進行分析，結(jié)果表明三種方法均為有效的抽提A ．a(chǎn) l t e r n a t a 菌絲細胞壁蛋白的方法。其中，熱堿法抽提蛋

5、白含量最大，常溫堿法次之，S D S 法最??；三種方法所抽提蛋白主要成分均一致( > 4 0 ％) ，但所抽提的蛋白組分又有差異。S D S 法和常溫堿法相似性極大( ≥8 0 ％) ，而二者與熱堿法差異相對較大：三種方法所得到的細胞壁抽提液的含糖量各不相同，常溫堿法含糖量很低，S D S 法與熱堿法含糖量則很高，以S D S 法為最高：含糖量越高，其對蛋白質(zhì)研究影響越大。本研究僅僅對蛋白質(zhì)的抽提方法做了比較和研究，這些方法所抽提

6、到的非蛋白組分對隨后的研究是否有影響或有哪些影響還需進一步的研究。2 ．A ．a(chǎn) l t e r n a t a 菌絲細胞壁可溶性蛋白抽提液對D t e n e l l u m 的孢子具有較強的凝集力，用氯仿一異戊醇去除蛋白后，對Dt e n e l l u m 的孢子的凝集力則顯著下降，這說明起凝集作用的因子很可能是一種蛋白質(zhì)。經(jīng)硫酸銨沉淀，D E A E ．S e p h a r o s e 陰離子交換柱層析和S e p h a c

7、 r y lS - 1 0 0 吩子篩層析分離到了這種蛋白，活性分析表明它是一種凝集素，定名為A A L ，分子量為3 7 k D a ，其等電點是p H 4 ．7 ，最大紫外吸收波長為2 8 2 n m 。經(jīng)糖染色鑒定為一種糖蛋白，中性糖含量約為1 4 ％。本研究結(jié)果表明A A L 在A a l t e r n a t a 菌絲和O ．t e n e l l u m 的孢子吸附事件中扮演著重要角色，對O ．t e n e l l u