枸杞多糖對己烯雌酚致成年雄性倉鼠生精損害的緩解作用及機理研究.pdf

1、本實驗旨在研究己烯雌酚（Diethylstilbestrol，DES）對成年雄性倉鼠生殖損傷的作用機制及枸杞多糖（Lyciumbar barum polysaccharide，LBP）的緩解作用。將66只成年雄性倉鼠隨機分為空白對照組(A)，DES組(B)，1 mg/kg、10mg/kg及50 mg/kg LBP組(C，D，E)及VC+VE組(F)(n=11)。除對照組外，其余5組均皮下注射己烯雌酚，對照組注射等劑量的橄欖油，連續(xù)用藥7

2、d，同時C、D、E組分別灌胃1、10、50 mg/kg的LBP，F(xiàn)組灌服100 mg/kg的VC及200 IU/kg的VE，A、B組灌服等劑量的生理鹽水。于末次給藥24 h后，乙醚麻醉倉鼠，心臟采血，分離血清，分別用于氧化指標(biāo)SOD、GSH-Px、MDA及激素T、LH、FSH的檢測;分別摘取兩側(cè)睪丸、附睪、精囊腺，迅速去除周圍脂肪及結(jié)締組織稱量并計算臟器指數(shù);于波恩氏液固定睪丸制成切片觀察組織學(xué)變化，并進行免疫組化Bax、Fas、Fas

3、L及Caspase-3的檢測;取睪丸迅速保存于液氮中進行RT-PCR及Western-blot檢測，確定Bcl-2、Bax、Fas、FasL及Caspase-3的表達。
　　結(jié)果顯示DES顯著降低倉鼠體重、器官重量及器官指數(shù)，而10/50 mg/kg LBP及維生素對其有顯著緩解作用(P＜0.05);DES處理組倉鼠睪丸組織結(jié)構(gòu)嚴(yán)重?fù)p傷，LBP作用后其損傷顯著減輕，其中以10/50 mg/kg LBP的作用最為明顯，VC+VE也對

4、其有的緩解作用，且50 mg/kg LBP組與VC+VE組無顯著差異。通過免疫組織化學(xué)、RT-PCR及Western-blot的方法檢測睪丸組織Bcl-2、Bax、Fas、FasL及Caspase-3的表達，結(jié)果顯示DES顯著降低Bcl-2的表達(P＜0.01)，提高Bax、Fas、FasL及Caspase-3的表達（P＜0.05）;給予不同劑量的LBP后，Bcl-2的表達呈劑量依賴性增加，以50 mg/kg LBP增加最為顯著(P＜0

5、.01)，Bax、Fas、FasL及Caspase-3的表達呈LBP劑量依賴性降低，以50 mg/kg LBP組表達最低(P＜0.01);與VC+VE組相比，50 mg/kg LBP對凋亡蛋白的調(diào)節(jié)作用差異不顯著;在抗氧化指標(biāo)檢測中，DES顯著性降低血清SOD、GSH-Px水平(P＜0.01)，增加MDA水平(P＜0.01);補充不同劑量的LBP后，血清SOD、GSH-Px水平增加(P＜0.01)，而MDA水平下降(P＜0.01)，VC

6、+VE組對機內(nèi)抗氧化指標(biāo)的作用要優(yōu)于LBP組;對血清生殖激素的檢測發(fā)現(xiàn)，血清FSH、LH和T的水平在DES作用下降低（P＜0.01）;而LBP對血清中激素的水平有不同程度的提高，其中以50 mg/kg作用最顯著(P＜0.01)。
　　結(jié)論:本實驗證實，DES通過降低機體抗氧化酶活性，擾亂生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)，激活體內(nèi)的生殖凋亡途徑導(dǎo)致成年雄性倉鼠生殖損傷;補充不同劑量的LBP后，LBP降低睪丸組織的脂質(zhì)過氧化水平，升高抗氧化酶活性;提高