枸杞多糖對(duì)雙酚A所致小鼠睪丸生精細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用研究.pdf

1、工業(yè)原料雙酚A(bisphenolA,BPA)廣泛存在于環(huán)境當(dāng)中,其對(duì)人類及動(dòng)物生殖系統(tǒng)的不良影響備受關(guān)注。研究證實(shí),枸杞多糖(Lyciumbarbarumpolysaccharide,LBP)能夠提高機(jī)體抗氧化能力,調(diào)節(jié)小鼠生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)的功能,從而有效對(duì)抗雙酚A造成的生精損害。本試驗(yàn)通過BPA構(gòu)建小鼠睪丸損傷模型,運(yùn)用免疫組化方法和流式細(xì)胞術(shù)檢測枸杞多糖對(duì)雙酚A暴露小鼠睪丸生精細(xì)胞中Caspase-3、Bc1-2/Bax和Fas/F

2、asL凋亡蛋白表達(dá)及DNA倍體的變化,研究枸杞多糖對(duì)雙酚A所致小鼠睪丸生精細(xì)胞凋亡的影響,并探討枸杞多糖抑制雙酚A誘導(dǎo)小鼠生精細(xì)胞凋亡的機(jī)制。將50只雄性昆明小鼠,正常飼養(yǎng)七天后隨機(jī)分為5組(10只/組),分別為正常對(duì)照組、BPA組和三個(gè)不同劑量的枸杞多糖組。除對(duì)照組注射等量橄欖油外,其余各組連續(xù)7d腹腔注射20mg·kg-1·d的BPA,建立生精損傷模型。同時(shí)枸杞多糖組分別灌服50、100、200mg·kg-1不同劑量的LBP,對(duì)照組

3、和BPA組灌服等量生理鹽水。組織切片觀察睪丸組織病理學(xué)變化,免疫組化方法測定生精細(xì)胞Caspase-3、Bcl-2、Bax、Fas和FasL蛋白的表達(dá),運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)分析DNA倍體測定細(xì)胞凋亡率。睪丸組織病理結(jié)果顯示,枸杞多糖對(duì)雙酚A誘導(dǎo)的小鼠睪丸組織結(jié)構(gòu)損傷有明顯的改善作用,100和200mg·kg-1的LBP組曲細(xì)精管結(jié)構(gòu)與BPA組比較有顯著改善;免疫組化結(jié)果表明,BPA能夠使凋亡蛋白Caspase-3的表達(dá)增加,統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示陽性細(xì)

4、胞的表達(dá)數(shù)量顯著高于對(duì)照組(P＜0.01),添加LBP后各治療組Caspase-3陽性細(xì)胞的表達(dá)數(shù)量與BPA組相比均顯著減少(P＜0.01),并隨著LBP劑量增加凋亡細(xì)胞數(shù)逐漸下降;BPA能顯著增加睪丸生精細(xì)胞中凋亡促進(jìn)基因Bax的陽性表達(dá)數(shù)量(P＜0.01),降低凋亡抑制基因Bc1-2的陽性表達(dá)數(shù)量(P＜0.05)。添加LBP后,200mg·kg-1LBP組生精細(xì)胞中Bax表達(dá)較BPA組下降(P＜0.01),Bc1-2的陽性表達(dá)較BP

5、A組顯著增加(P＜0.01),Bc1-2/Bax的比值隨之顯著上升,從而抑制生精細(xì)胞凋亡;BPA可顯著增加睪丸生精細(xì)胞Fas和FasL陽性細(xì)胞數(shù)量(P＜0.01),添加枸杞多糖后100mg·kg-1LBP組和200mg·kg-1LBP組Fas和FasL表達(dá)量較BPA組明顯下降(1P＜0.01);流式檢測結(jié)果顯示,BPA組睪丸生精細(xì)胞凋亡率顯著高于正常組P＜0.01);添加枸杞多糖后凋亡率較BPA組下降,其中100mg·kg-1LBP組和

6、200mg·kg-1LBP組與BPA組差異顯著(P＜0.01),較正常組差異不顯著。DNA倍體檢測結(jié)果顯示,BPA組1C所占百分比少于正常組(P＜0.05);添加枸杞多糖后1C和4C所占百分比均有所增加,4C所占百分比與正常組相比差異顯著(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:枸杞多糖可調(diào)控凋亡途徑中相關(guān)蛋白的表達(dá),通過增加線粒體途徑中凋亡抑制基因Bc1-2的表達(dá),減少凋亡促進(jìn)基因Bax的表達(dá),抑制死亡信號(hào)受體途徑中Fas和FasL凋亡