環(huán)境激素雙酚A對SD大鼠睪丸生精細(xì)胞凋亡作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　 當(dāng)前，隨著工業(yè)化生產(chǎn)的進(jìn)一步大發(fā)展，工業(yè)污染物大量排放，惡性腫瘤、代謝性疾病、男性不育等發(fā)病率逐年上漲。已有大量的實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，這些疾病發(fā)生率的上升與環(huán)境污染物的排放有著密不可分的關(guān)系。因此，環(huán)境污染亦成為一個全球性的亟待解決的問題。在此大背景下，環(huán)境內(nèi)分泌干擾物（即環(huán)境激素）也成為國內(nèi)外學(xué)者的熱門研究對象。雙酚A(bisphenolA，BPA)即是環(huán)境內(nèi)分泌干擾物的一種，廣泛應(yīng)用于人們的生產(chǎn)生活;由于其具有弱雌激

2、素和強(qiáng)抗雄激素作用，具有很強(qiáng)的生殖發(fā)育毒性，越來越得到國內(nèi)外學(xué)者的重視。而且，近幾年男性的生育能力明顯下降，科學(xué)家將焦點(diǎn)更多的放在了對環(huán)境內(nèi)分泌干擾物尤其是雙酚A的研究上。
　　 本實(shí)驗(yàn)就是通過制造雙酚A染毒動物模型，研究雙酚A在體內(nèi)濃度積聚對大鼠睪丸的毒性作用，研究生精細(xì)胞凋亡途徑中幾種關(guān)鍵蛋白Bcl-2、CytC、Caspase-3的表達(dá)情況，并觀察雙酚A染毒大鼠精子的變形情況，以進(jìn)一步證實(shí)雙酚A的生殖毒性作用，為雙酚A影響

3、男性生精細(xì)胞凋亡提供更加直接的實(shí)驗(yàn)證據(jù)，從而有望為臨床上預(yù)防和治療男性不育尋求更多的可靠依據(jù)。
　　 方法:
　　 1、實(shí)驗(yàn)動物:本實(shí)驗(yàn)所用動物均為由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心采購的清潔級SD雄性大鼠，40只，8周齡，體重在175-210g。所有大鼠均分籠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，自由進(jìn)食飲水。
　　 2、實(shí)驗(yàn)動物分組及造模:將40只SD大鼠隨機(jī)分為4組（對照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組），采用灌胃針將溶于玉米油的雙酚A

4、按照不同濃度(0、2、20、200mg/Kg)灌服，每日1次，每次1ml，共持續(xù)8周，每周稱重1次，并按照各組SD大鼠的體重均數(shù)及時調(diào)整雙酚A的給藥劑量。
　　 3、實(shí)驗(yàn)標(biāo)本處理:染毒結(jié)束后，將SD大鼠依次稱重、處死，迅速取出睪丸、附睪依次稱重，并計(jì)算臟器系數(shù);將睪丸用多聚甲醛固定，制成石蠟切片行免疫組化染色分析;取附睪，制成精子混懸液于鏡下計(jì)數(shù)精子數(shù)、觀察精子活動、統(tǒng)計(jì)精子畸形率;結(jié)果采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

5、r>　　 結(jié)果:
　　 1、SD大鼠的日常活動觀察:隨著雙酚A灌胃染毒時間延長，高劑量組SD大鼠逐漸出現(xiàn)煩躁不安、易興奮、易激惹癥狀，尤其是在灌胃時反抗強(qiáng)烈，但是在半小時后癥狀消失，并且出現(xiàn)被毛凌亂、不光滑，活動減少、進(jìn)食減少、稀便等，低、中劑量組和對照組相比較，則無明顯差別;
　　 2、雙酚A對SD大鼠體重以及睪丸重量的影響:中、高劑量組染毒SD大鼠與對照組SD大鼠相比，體重增長緩慢，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05

6、)，低劑量組染毒SD大鼠與對照組SD大鼠相比，體重?zé)o明顯變化，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;中、高劑量組染毒SD大鼠的睪丸臟器系數(shù)與對照組SD大鼠相比，同樣其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而低劑量組染毒SD大鼠睪丸臟器系數(shù)與對照組SD大鼠相比，其差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 3、免疫組織化學(xué)觀察分析Bcl-2、CytC、Caspase-3在不同劑量組染毒SD大鼠生殖細(xì)胞上的表達(dá)情況:觀察曲細(xì)精管各級生精細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)Bcl-2在各級精

7、原細(xì)胞胞漿中均有表達(dá)，與對照組相比隨染毒劑量增加，Bcl-2表達(dá)減少;CytC在初級和次級精原細(xì)胞胞漿、胞核有表達(dá)，與對照組相比中、高劑量組CytC表達(dá)上調(diào);Caspase-3主要表達(dá)于近管腔側(cè)的精子細(xì)胞和精子，同樣與對照組相比中、高劑量組Caspase-3表達(dá)增加。
　　 4、鏡下觀察各組SD大鼠附睪中精子的情況:通過進(jìn)行精子計(jì)數(shù)、精子活動度和精子畸形率的觀察，發(fā)現(xiàn)低劑量組與對照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，中、高劑量組與對照組相比有明