雙酚A誘導(dǎo)成年SD大鼠睪丸生殖細(xì)胞凋亡與Fas-FasL和C-myc基因表達(dá)的關(guān)系.pdf

1、目的:
　　 當(dāng)前隨著工業(yè)的發(fā)展，致使環(huán)境污染也越來(lái)越嚴(yán)重，而在生產(chǎn)大量化工材料和使用中，我們發(fā)現(xiàn)環(huán)境污染對(duì)人類健康的影響也越來(lái)越明顯，甚至危害到人類下一代的健康，也使得人類對(duì)這種現(xiàn)象高度重視起來(lái)，而雙酚A使得人們非常重視。雙酚A(bisphenolA，BPA)是生產(chǎn)環(huán)氧樹脂、聚碳酸酯的主要原料之一，在人類的生產(chǎn)生活中應(yīng)用很普遍，比如:塑膠用品、嬰兒奶瓶、口腔科應(yīng)用物質(zhì)等。隨著上述用品的大量使用，雙酚A對(duì)環(huán)境中造成的污染也日益嚴(yán)

2、重，對(duì)人類健康影響很大。近年來(lái)男性的生育能力趨于下降，國(guó)外人Davis等人[1]曾報(bào)道，人類的精子密度1990年較1940年下降了約50％，而精液量減少了25％，而男性生殖系統(tǒng)發(fā)育異常的發(fā)病率也增加近1倍，報(bào)道分析表明此現(xiàn)象與暴露的環(huán)境雌激素有關(guān)，這也進(jìn)一步說明環(huán)境污染成為造成男性生育能力下降的主要因素之一。還有人報(bào)道，生精細(xì)胞的大量凋亡可能是BPA引起的;同時(shí)，還會(huì)引起睪丸內(nèi)表達(dá)量增加是Fas和FasL蛋白[2]。目前關(guān)于環(huán)境雌激素對(duì)

3、生殖細(xì)胞凋亡影響的研究報(bào)道越來(lái)越多，但大多數(shù)的研究都是采用體內(nèi)研究的方法局限在整體和細(xì)胞的水平上而展開的環(huán)境激素雙酚A。因此，我們換一種視角，以體外采用低、中及高劑量的BPA染毒，來(lái)誘導(dǎo)單獨(dú)體外培養(yǎng)的睪丸生精細(xì)胞，探討雙酚A誘發(fā)睪丸生殖細(xì)胞凋亡與Fas/FasL與C-myc基因的關(guān)系。近些年來(lái)對(duì)男性生育能力影響的研究已高度被全球科學(xué)家們關(guān)注并研究。
　　 本實(shí)驗(yàn)利用雙酚A灌胃染毒雄性SD大鼠模型來(lái)監(jiān)測(cè)生殖細(xì)胞凋亡以及Fas/Fa

4、sL與C-myc基因大鼠睪丸中的表達(dá)，并進(jìn)一步探討Fas/FasL與C-myc基因介導(dǎo)的生殖細(xì)胞凋亡途徑之間的關(guān)系?？蔀榻沂綛PA造成生殖細(xì)胞凋亡的機(jī)制提供理論依據(jù)，并為防治因BPA污染所造成的動(dòng)物乃至人類的繁殖能力下降提供新線索，以期待進(jìn)一步為預(yù)防和解決環(huán)境激素雙酚A對(duì)人類男性生育能力下降提供依據(jù)。
　　 材料與方法:
　　 1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及材料:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選取清潔級(jí)8周齡成年雄性SD(Sprague-Dawley)大鼠，

5、體重在180-200g。所有大鼠均分籠飼養(yǎng)于動(dòng)物飼養(yǎng)房，按要求一周用于實(shí)驗(yàn)，同時(shí)每天都模擬自然采光12小時(shí)，均自由采食全價(jià)顆粒飼料，飲用自來(lái)水，每天定時(shí)給予實(shí)驗(yàn)大鼠進(jìn)行染毒，并且每周染毒5次，染毒8周后用于實(shí)驗(yàn)。
　　 2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及模型制作:將四十只大鼠隨機(jī)分為四組即對(duì)照組、低劑量組、中劑量組和高劑量組，每組十只。各個(gè)實(shí)驗(yàn)組分別用玉米油配制成不同劑量濃度的BPA灌胃染毒，低劑量組給予2mg/kgBPA灌胃，中劑量組給予20

6、mg/kgBPA灌胃，高劑量組給予200mg/kgBPA灌胃，對(duì)照組給予的是安慰劑灌等量玉米油，需每天進(jìn)行。
　　 3、實(shí)驗(yàn)標(biāo)本處理:模型制作成功后大鼠稱重，然后處死取睪丸附睪進(jìn)行稱重，睪丸中性甲醛固定，包埋切片行HE染色和免疫組化染色，對(duì)比分析染毒組和對(duì)照組差異，結(jié)果應(yīng)用SPSS軟件系統(tǒng)進(jìn)行分析。
　　 結(jié)果:
　　 1、大鼠的日常行為的改變:我們發(fā)現(xiàn)高劑量組大鼠表現(xiàn):被毛凌亂、活動(dòng)減少、易激惹、食欲下降和出現(xiàn)

7、軟便等癥狀;而其他組大鼠行為未見明顯的變化。
　　 2、大鼠體重及睪丸重量的意義:稱重后中劑量組和高劑量染毒組大鼠體重與對(duì)照組大鼠體重相比增加緩慢，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，低劑量組大鼠體重與對(duì)照組相比差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（見Fig.1、Table1）。各染毒低劑量組大鼠睪丸重量與對(duì)照組相比稍低，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，中劑量組和高劑量組與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜0.05（見Fig.2、Table2）。
　　 3、大

8、鼠睪丸HE染色的結(jié)果分析:觀察實(shí)驗(yàn)對(duì)照組的大鼠睪丸組織結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn)其睪丸發(fā)育較好，精細(xì)小管排列有序較多，精原細(xì)胞、各級(jí)精母細(xì)胞及成熟的精子細(xì)胞順次整齊的排列，管腔內(nèi)有大量的精子存活。中、高劑量組睪丸發(fā)育較差，精細(xì)小管排列散亂，間質(zhì)細(xì)胞松散，部分精細(xì)小管腔內(nèi)生殖細(xì)胞排列無(wú)序。低劑量組大鼠切片與對(duì)照組無(wú)明顯變化。
　　 4、實(shí)驗(yàn)對(duì)照組、低劑量組、中劑量組及高劑量組的Fas/FasL和C-myc基因與BPA染毒睪丸生殖細(xì)胞凋亡的變化見表。

9、結(jié)果顯示，低劑量組與對(duì)照組相比睪丸發(fā)生凋亡的生殖細(xì)胞無(wú)顯著增加(P＞0.05)，F(xiàn)as/FasL和C-myc基因表達(dá)亦無(wú)顯著增加(P＞0.05);中、高劑量組與對(duì)照組及低劑量組相比睪丸發(fā)生凋亡的生殖細(xì)胞顯著增加，F(xiàn)as/FasL和C-myc基因表達(dá)亦均有顯著增加(P＜0.01)。
　　 對(duì)照組與低劑量組大鼠睪丸內(nèi)Fas/FasL和C-myc相應(yīng)的AI相比無(wú)明顯變化，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）;但低劑量組及對(duì)照組與中、高劑量組大

10、鼠睪丸內(nèi)Fas/FasL和C-myc相應(yīng)的AI相比，有明顯變化，表達(dá)細(xì)胞凋亡指數(shù)增加明顯(P＜0.05)。中劑量組與高劑量組大鼠睪丸內(nèi)Fas/FasL和C-myc相應(yīng)的AI相比大鼠睪丸內(nèi)Fas/FasL和C-myc相應(yīng)的AI相比，亦變化明顯，細(xì)胞凋亡指數(shù)增加明顯（P＜0.05）。
　　 結(jié)論:
　　 BPA染毒（經(jīng)口）給予雄性大鼠后，可對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠的生殖系統(tǒng)產(chǎn)生一定的毒害作用，而隨著攝入雙酚A的濃度達(dá)到一定的劑量就可以使實(shí)