反義c-myc誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞凋亡及hTERT蛋白表達(dá)抑制的研究.pdf

1、瀘州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文反義c-myc誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞凋亡及hTERT蛋白表達(dá)抑制的研究姓名：彭春申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)（遺傳）指導(dǎo)教師：稅青林200405011 反義 c - m y c 誘導(dǎo) M C F - 7 細(xì)胞凋亡及 h T E R T 蛋白表達(dá)抑制的研究 摘 要 目的：研究脂質(zhì)體 LipfectAMINE TM（L R ）介導(dǎo)的 c- myc 反義寡核苷酸（ASODN） 誘導(dǎo) MCF- 7 細(xì)胞凋亡及對端

2、粒酶催化亞單位 hTERT 蛋白表達(dá)的抑制效應(yīng)。 為針對端粒酶活性抑制的乳腺癌的基因治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：1：采用 Gimsa 染色法鏡檢并記數(shù)經(jīng)脂質(zhì)體包裹的反義 c- myc 處理 MCF- 7 細(xì)胞 24h、48h、72h 等不同時間點(diǎn)及正義 SODN+LR 處理細(xì)胞 72h 后的凋亡細(xì)胞（小體）數(shù)，并觀察 MCF- 7 細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變。2：提取經(jīng)反義 c- myc 處理7 2 h 后的 MCF- 7 細(xì)胞的總 DNA， DNA

3、 瓊脂糖凝膠電泳檢測細(xì)胞凋亡時 DNA片段的改變。 3： 利用流式細(xì)胞儀定量檢測經(jīng)反義 c- myc 處理 MCF- 7 細(xì)胞 24h、48h、72h、96h 及正義 SODN+LR 組處理 72h 后細(xì)胞凋亡情況。 4：采用免疫細(xì)胞化學(xué) ABC 法分別檢測轉(zhuǎn)染和未轉(zhuǎn)染細(xì)胞中 hTERT 蛋白的表達(dá)。結(jié)果：1 ：2.5umol/l 反義 c- myc 寡核苷酸分別作用 MCF- 7 細(xì)胞 24h，48h，72h 及5umol/l 正義

4、SODN+LR 處理 72h 后，均可見到細(xì)胞凋亡的特征形態(tài)學(xué)變化，細(xì)胞皺縮，染色質(zhì)凝集，核固縮并斷裂成數(shù)個大小不等的圓形顆粒及凋亡小體形成。凋亡細(xì)胞計(jì)數(shù)：各組凋亡小體數(shù)（按觀察每 1 0 0 個細(xì)胞記數(shù)）分別為 4.0、 5.0、 10.0、 19.0、 4.0。 經(jīng) ANOVA、 SNK 分析：陰性對照、 LR+AS24h、LR+72SO 無顯著差異（P ＞0 . 0 5 ） ，AS24h組與 AS48h組之間有顯著差異（P＜0 .