靶向性RNA干擾對MCF-7細胞與MSC細胞hTERT基因表達和細胞生長的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、瀘州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文靶向性RNA干擾對MCF7細胞與MSC細胞hTERT基因表達和細胞生長的影響姓名：段軼鋆申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：腫瘤分子遺傳學(xué)指導(dǎo)教師：稅青林20090501為攜帶DF3啟動子而無hTERT干擾序列的質(zhì)粒pGenesil10mir30DF3shRNAHK：CMV對照組為攜帶CMV啟動子的hTERT干擾質(zhì)粒pGenesil10mir30CMVshRNAhTERT；空白對照組僅含等量PBS液。以構(gòu)建的質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染乳腺癌

2、MCF7細胞和間充質(zhì)干細胞。轉(zhuǎn)染后12h，24h，48h，72h通過流式細胞儀檢測細胞生長凋亡情況；MTT法檢測細胞增殖情況；于轉(zhuǎn)染后48hELISA法檢測hTERT蛋白表達情況。結(jié)果：1重組質(zhì)粒pGenesil10mir30DF3shRNAhTERT經(jīng)酶切鑒定分析證實目的序列己插入到預(yù)計位點，符合設(shè)計要求，重組質(zhì)粒構(gòu)建成功。2重組質(zhì)粒pGenesil10mir30DF3shRNAhTERT酶切鑒定分析證實DF3啟動子已經(jīng)成功替代原質(zhì)粒

3、中CMV啟動子。3ELISA法檢測結(jié)果顯示：乳腺癌MCF7細胞的實驗組和CMV對照組hTERT蛋白濃度顯著下降。同時MSC細胞CMV對照組hTERT蛋白濃度顯著下降而實驗組hTERT蛋白濃度無顯著變化。4MTT結(jié)果顯示：乳腺癌MCF7細胞的實驗組和CMV對照組細胞在2472h范圍內(nèi)細胞增殖顯著抑制；而MSC細胞僅在CMV對照組增殖顯著抑制，MSC細胞實驗組細胞生長無顯著抑制。5流式細胞儀檢測細胞凋亡乳腺癌MCF7細胞實驗組和CMV對照組

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