應(yīng)用RNA干擾技術(shù)抑制MCF7-MX100細(xì)胞中BCRP表達(dá)和活性.pdf

1、浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文應(yīng)用RNA干擾技術(shù)抑制MCF7MX100細(xì)胞中BCRP表達(dá)和活性姓名：余彩虹申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：藥學(xué)指導(dǎo)教師：曾蘇蔣惠娣20130306浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要2、化學(xué)合成siIⅢA及其對(duì)BcRP的干擾作用考察了針對(duì)BcRPmRNA不同位點(diǎn)獲得的三條化學(xué)合成siI礬A(siBcI沖1，si—BCRP2，si—BcRP3)對(duì)MCF7／Mxl00細(xì)胞中BcRP蛋白的干擾作用。RTPCR和wrestemblot檢測(cè)

2、結(jié)果顯示：si—BCRP2和si—BcRP3組干擾效果明顯，mRNA抑制率分別為97％和95％，蛋白的表達(dá)抑制率分別為76％和71％。流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：si—BcRP2和siBcRP3組對(duì)米托葸醌的敏感性明顯提高，與對(duì)照組差異有顯著性(PO01)。3、干擾BCRP／ABCG2基因的慢病毒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的建立從前面兩部分研究篩選出干擾效果好的干擾序列，擴(kuò)增siRNA模板，酶切連接到pTⅪPz質(zhì)粒中，然后采用轉(zhuǎn)染試劑Rochextre

3、meGENE在狀態(tài)良好的lenti293t細(xì)胞中進(jìn)行慢病毒包裝。包裝48h后收集病毒液，McF7／Mxloo耐藥細(xì)胞用8“g／mLpolybrene感染病毒。然后經(jīng)過嘌呤霉素(1ug／mL)篩選和強(qiáng)力霉素(1肛∥mL)誘導(dǎo)，構(gòu)建干擾BcIo／ABcG2基因的慢病毒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株：LentiBcRP2和LentiBcRP3。RTPcR，westemblot和流式細(xì)胞術(shù)法檢測(cè)各組慢病毒干擾穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株中BcI沖的基因表達(dá)以及活性情況。結(jié)果

4、顯示，LentiBcRP2和Lenti—BCRP3組的mI斟A抑制率分別為72％和56％，蛋白表達(dá)的抑制率分別為70％和53％，Lenti—BcI沖2的藥物敏感性也顯著增加(Po05)。4、干擾BcI沖／ABCG2基因的慢病毒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的應(yīng)用本章考察了二氫楊梅素(30mol／L)，異鼠李素(25岬ol／L)，淫羊藿苷(10pmol／L)在慢病毒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株中的單獨(dú)積聚以及與米托葸醌(5“mol／L)的相互作用。單獨(dú)積聚總孵育時(shí)間為