2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  培養(yǎng)人滋養(yǎng)細(xì)胞(HTR8-SVneo),通過RNA干擾技術(shù)抑制性激素結(jié)合球蛋白(Sex hormone binding globulin,SHBG)基因表達(dá),從而研究SHBG的生物學(xué)行為。
  方法:
  將人滋養(yǎng)細(xì)胞分成6組:(1)空白對照組(2)轉(zhuǎn)染脂質(zhì)體組(3)轉(zhuǎn)染非特異性siRNA組(4)轉(zhuǎn)染特異性siRNAⅠ(5)轉(zhuǎn)染特異性siRNAⅡ(6)轉(zhuǎn)染特異性siRNAⅢ,于轉(zhuǎn)染24小時(shí)后采用Realti

2、me PCR及WesternBlot方法檢測各組滋養(yǎng)細(xì)胞中SHBG的表達(dá)。利用Hoechst33258染色法檢測細(xì)胞凋亡,RealtimePCR及Westernblot方法測定凋亡相關(guān)抗體caspase3 mRNA及蛋白的表達(dá)水平。采用SPSS軟件進(jìn)行分析。
  結(jié)果:
  成功培養(yǎng)人滋養(yǎng)細(xì)胞,轉(zhuǎn)染24小時(shí)檢測SHBGmRNA表達(dá)量。結(jié)果如下:(1)空白對照組設(shè)為1;(2)轉(zhuǎn)染脂質(zhì)體組0.9522<±0.3065;(3)轉(zhuǎn)染

3、非特異性siRNA組1.881±0.5839;(4)轉(zhuǎn)染特異性siRNAⅠ0.1115±0.0379;(5)轉(zhuǎn)染特異性siRNAⅡ0.1817±0.1367;(6)轉(zhuǎn)染特異性siRNAⅢ0.1364±0.02845??梢娹D(zhuǎn)染特異性siRNA后SHBG表達(dá)減少,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Western Blot檢測SHBG蛋白條帶各轉(zhuǎn)染組較對照組表達(dá)明顯降低。各組細(xì)胞于轉(zhuǎn)染24小時(shí)后進(jìn)行Hoechst33258染色法檢測細(xì)胞凋亡

4、,熒光顯色后可見轉(zhuǎn)染組致密濃染顆粒較對照組明顯增加,RealtimePCR檢測caspase3 mRNA表達(dá)量結(jié)果如下:(1)空白對照組設(shè)為1;(2)轉(zhuǎn)染脂質(zhì)體組1.004<±0.1971;(3)轉(zhuǎn)染非特異性siRNA組1.293±0.3120;(4)轉(zhuǎn)染特異性siRNAⅠ27.54±1.841;(5)轉(zhuǎn)染特異性siRNAⅡ57.65±11.02;(6)轉(zhuǎn)染特異性siRNAⅢ54.96±10.49??梢娹D(zhuǎn)染特異性siRNA后細(xì)胞凋亡相關(guān)

5、抗體caspase3表達(dá)增加,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。WesternBlot檢測caspase3蛋白條帶各轉(zhuǎn)染組較對照組表達(dá)明顯增加。
  結(jié)論:
  利用RNA干擾抑制人滋養(yǎng)細(xì)胞中SHBG基因的表達(dá),成功使SHBG表達(dá)減少,可誘導(dǎo)滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡。
  意義:
  通過對人滋養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行siRNA的基因干擾,抑制人滋養(yǎng)細(xì)胞中SHBG基因表達(dá),導(dǎo)致人滋養(yǎng)細(xì)胞過度凋亡。GDM時(shí)由于血中高胰島素水平抑制了絨毛滋

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