RNA干擾抑制vimentin基因?qū)︻^頸鱗癌細(xì)胞的影響.pdf

1、前言
　　鱗狀細(xì)胞癌是頭頸部最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，淋巴轉(zhuǎn)移和侵襲性生長(zhǎng)是常見(jiàn)的致死原因，雖然近年來(lái)各種治療措施應(yīng)用于臨床，但患者的5年生存率未有明顯改善，因此有必要對(duì)腫瘤的生物學(xué)行為進(jìn)行基礎(chǔ)研究，以尋找更有效的治療方案。CCR7是一種趨化因子受體，與頭頸鱗癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，CCR7下游的信號(hào)通路非常復(fù)雜，已經(jīng)被證實(shí)其下游信號(hào)因子的包括PI3K、PLC及NF-kB，但其詳細(xì)的信號(hào)通路尚未完全清楚。Vimentin是一種Ⅲ型中間

2、絲蛋白，在上皮間質(zhì)化中其重要作用，而上皮間質(zhì)化是惡性腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。我們猜測(cè)CCR7有可能通過(guò)vimentin來(lái)調(diào)控細(xì)胞的侵襲和趨化等能力。因此，此實(shí)驗(yàn)主要通過(guò)RNA干擾技術(shù)抑制vimentin基因表達(dá)后，檢測(cè)細(xì)胞的侵襲、遷移能力是否改變，進(jìn)而研究vimentin在CCR7信號(hào)通路中的作用。
　　材料與方法
　　轉(zhuǎn)染后，利用RT-PCR和Westernblot證明vimentin和CCR7基因被沉默后，用Trans

3、well小室檢測(cè)細(xì)胞的遷移和侵襲能力。使用SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。以p＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　轉(zhuǎn)染后，Western-blot和RT-PCR提示CCR7和vimentin的表達(dá)均收到明顯抑制，與對(duì)照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)，提示轉(zhuǎn)染成功。
　　CCL19處理細(xì)胞后，vimentin的表達(dá)水平明顯升高，與空白組相比，差異具有顯著性(p＜0.05)，而使用CCR7positi

4、veshRNA抑制CCR7作用后，CCL19誘導(dǎo)的vimentin的蛋白表達(dá)水平恢復(fù)至空白對(duì)照組水平。說(shuō)明CCR7活化后能夠調(diào)節(jié)vimentin的表達(dá)。
　　經(jīng)過(guò)CCL19刺激后，PCI-37B細(xì)胞的遷移能力顯著增強(qiáng)，與空白組對(duì)比，具有顯著性差異(p＜0.05)。利用vimentinsiRNA預(yù)處理細(xì)胞后，結(jié)果表明CCL19誘導(dǎo)的PCI-37B細(xì)胞的遷移能力受到明顯抑制，與CCL19相比，差異具有顯著性(p＜0.05)。