小干擾RNA靶向VEGF基因在體內外抑制乳腺癌細胞增殖的研究.pdf

1、背景與目的：血管生成與腫瘤生長、侵襲、轉移密切相關。血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)能特異地促進內皮細胞分裂、增殖及遷移，在腫瘤新生血管生成過程中起著至關重要的作用。通過RNA干擾技術(RANinterference，RNAi)抑制VEGF表達的抗血管生成療法可有效應用于腫瘤治療。本課題采用化學修飾的小干擾RNA(small interfering RNA，siRNA)在

2、體內外抑制VEGF基因表達，探討化學修飾的siRNA介導的RNAi在乳腺癌基因治療的可行性和特異性。 方法 選用陽離子脂質體Lipofectamine2000<'TM>作為轉染試劑，將針對人VEGF基因的siRNA轉染人類乳腺癌細胞株MCF-7和裸鼠移植瘤，在體內外誘導RNAi。采用四甲基偶氮唑藍(MTT)法檢測細胞增殖，Hoechst33258熒光染色觀察細胞凋亡情況，逆轉錄聚合酶鏈反應(reverse transcr

3、iption polymerase chain reaction，RT-PCR)及蛋白印跡試驗(Western Blotting)檢測siRNA治療組和對照組VEGF,Bcl-2和Bax基因表達的變化。 結果 體外實驗結果顯示：靶向VEGF基因siRNA轉染乳腺癌MCF-7細胞后，細胞生長抑制率達52.5％；Hoechst33258熒光染色顯示細胞內可見凋亡小體；VEGF及Bcl-2 mRNA和蛋白表達水平顯著降低(p<