靶向VEGF的siRNA協(xié)同5-FU抑制人乳腺癌細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:探討慢病毒介導(dǎo)靶向VEGF小干擾RNA(small interfering RNA，siRNA)對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MCF-7增殖、凋亡和凋亡通路中基因表達(dá)的影響，以及聯(lián)合應(yīng)用抗癌藥5-氟尿嘧啶的協(xié)同作用。
　　 方法:以攜帶VEGF siRNA序列的慢病毒重組載體感染正常的MCF-7細(xì)胞，經(jīng)反復(fù)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化，確定感染條件;將人乳腺癌細(xì)胞MCF-7分為五組:正常對(duì)照組不作特殊處理，陰性對(duì)照組感染NC-Lv陰性病毒，慢病毒RNA干擾組

2、感染VEGF-RNAi-Lv慢病毒，5-FU組用5-FU處理MCF-7細(xì)胞，慢病毒VEGF-RNAi-Lv+5-FU組用5-FU處理VEGF-RNAi-Lv慢病毒感染的MCF-7細(xì)胞;提取細(xì)胞的總RNA和蛋白，利用RT-PCR法檢測(cè)VEGF、p21及bc卜2mRNA的表達(dá)，Western blot檢測(cè)VEGF、SIRT1、p53、p21、bcl-2、survivin蛋白的表達(dá);利用細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒（CCK-8）和流式細(xì)胞術(shù)檢

3、測(cè)RNAi及協(xié)同5-FU對(duì)細(xì)胞增殖及凋亡的影響。
　　 結(jié)果:慢病毒對(duì)MCF-7細(xì)胞的感染率達(dá)90％以上;與正常對(duì)照組相比，RT-PCR檢測(cè)顯示慢病毒VEGF-RNAi-Lv干擾組細(xì)胞VEGF、bcl-2的mRNA表達(dá)水平明顯下調(diào)（P＜0.05)，p21 mRNA表達(dá)水平明顯上調(diào)（P＜0.05），Western blot顯示慢病毒VEGF-siRNA-Lv干擾組細(xì)胞VEGF、SIRT1、bcl-2、survivin的蛋白表達(dá)水平

4、明顯下調(diào)（P＜0.05)，p53、p21蛋白表達(dá)水平明顯上調(diào)（P＜0.05），而陰性對(duì)照組均無(wú)明顯變化（P＞0.05）;與正常對(duì)照組及陰性對(duì)照組相比，CCK-8及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)顯示慢病毒VEGF-RNAi-Lv干擾組、5-FU組及慢病毒VEGF-RNAi-Lv+5-FU組的細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，增殖明顯受到抑制，細(xì)胞的增殖抑制率及凋亡率顯著提高(P＜0.05)，聯(lián)合治療組的協(xié)同作用更為明顯(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:慢病毒介導(dǎo)的RN