NO在人乳腺癌細胞中的過量產(chǎn)生及其對ADM、5-Fu敏感性的調節(jié)作用.pdf

1、目的: 通過體外實驗研究，在細胞因子白細胞介素-1β(IL-1β)的作用下，人乳腺癌細胞MCF-7產(chǎn)生的一氧化氮(NO)對于調節(jié)腫瘤細胞對化療藥物的敏感性的影響，進一步闡明內源性NO對于減低腫瘤細胞耐藥性的可能性，探討其可能機制及用于輔助乳腺癌化學治療的可行性。 方法: 選取人乳腺癌細胞系MCF-7單層培養(yǎng)，應用IL-1β處理培養(yǎng)的MCF-7細胞，采用一氧化氮測試盒檢測不同濃度(10-13M、10-12M、10-

2、11M、10-10M、10-9M、10-8M)IL-1β、在不同時間(2h、4h、8h、16h、24h)處理MCF-7細胞后NO的產(chǎn)生情況，從而選擇適當?shù)乃幬餄舛群妥饔脮r間。應用Western Blot檢測IL-1β處理后MCF-7細胞誘導型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白的表達。根據(jù)上述結果，設置實驗組和對照組，選用經(jīng)典的乳腺癌治療藥物阿霉素(ADM)和氟尿嘧啶(5-Fu)，分別處理實驗組和對照組，采用四甲基偶氮唑藍(MTT)法檢測MCF

3、-7細胞對兩種化療藥物的敏感性；選用一氧化氮合酶(NOS)藥理學抑制劑NG-甲基-L-精氨酸(L-NMMA)和NO合成原料L-精氨酸(L-Arg)作為處理因素，采用MTT法檢測在以上兩種處理因素作用下MCF-7細胞對化療藥物敏感性。 結果: 在IL-1β與MCF-7細胞孵育的4h NO開始顯著增多(95.216μM)，并在8h達峰(148.661μM)，隨后逐漸下降，而未加入IL-1β的對照組，在整個培養(yǎng)過程中NO產(chǎn)量沒

4、有明顯變化。IL-1β作為一種細胞因子，誘導MCF-7細胞產(chǎn)生內源性NO，NO產(chǎn)生量與IL-1β劑量間存在著劑量依賴關系。Western Blot分析的結果顯示：無IL-1β誘導作用時，MCF-7細胞基本不表達iNOS蛋白，在IL-1β誘導作用下，細胞大量表達iNOS蛋白。同時無論L-Arg、L-NMMA存在與否，IL-1β誘導作用產(chǎn)生的iNOS蛋白都沒有差異。采用MTT法分別檢測1nM IL-1β作用8h后實驗組和對照組MCF-7細胞

5、的生存率，可見當ADM濃度為0.5μM和1μM時，經(jīng)IL-1β處理后的MCF-7細胞的生存率有較明顯的下降，當ADM濃度逐漸升高后，兩組的生存率差異不顯著。同樣，IL-1β在一定程度上有提高人乳腺癌細胞MCF-7對5-Fu敏感性的作用。iNOS的抑制劑L-NMMA的加入顯著提高了實驗組MCF-7細胞的生存率；L-Arg作為NO合成促進劑的加入，在一定程度上提高了化療藥的敏感性；當L-Arg、L-NMMA與IL-1β同時存在，腫瘤細胞的生

6、存率不會有明顯下降。 結論: 人乳腺癌細胞系MCF-7在一定劑量IL-1β及一定時間的作用下，通過誘導iNOS,能合成大量內源性的NO。內源性NO合成的增加能提高MCF-7細胞對ADM、5-Fu的化學敏感性。通過導入NOS抑制劑L-NMMA和NO合成促進劑L-Arg兩個處理因素，進一步顯示了是NO調節(jié)了腫瘤細胞的敏感性。IL-1β誘導iNOS合成NO增加，但在L-NMMA和L-Arg的作用下，iNOS的量不發(fā)生改變。本研