microRNA-200c在結(jié)直腸癌細(xì)胞中對(duì)5-FU化學(xué)敏感性的影響及其機(jī)制的研究.pdf

1、結(jié)直腸癌(Colorectal cancer，CRC)是最常見的消化道惡性腫瘤之一。在世界范圍內(nèi)其發(fā)病率位居惡性腫瘤發(fā)病率的第三位，死亡率位居癌癥相關(guān)死亡率的第五位，成為危害人民健康的主要因素。腫瘤在化療治療中，耐藥現(xiàn)象已成為影響腫瘤患者生存率和復(fù)發(fā)的嚴(yán)重問題。提高腫瘤對(duì)于化療藥物的敏感性成為結(jié)直腸癌研究的熱點(diǎn)。
　　microRNA-200c(miR-200c)屬于miR-200家族。研究報(bào)道，miR-200c在結(jié)直腸癌組織與正

2、常的癌旁組織相比存在異常表達(dá)，并且與結(jié)直腸癌的生長、增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，甚至于在結(jié)直腸癌的耐藥中也發(fā)揮著重要作用。
　　基于5-氟尿嘧啶(5-fluoronracil，5-FU)化療，半個(gè)世紀(jì)以來，一直是晚期CRC患者的主要治療手段?；颊邔?duì)5-FU的反應(yīng)率仍然不高，主要是因?yàn)槟退幍漠a(chǎn)生。因此，我們擬闡明miR-200c對(duì)CRC化療敏感性的影響。
　　目的:探討結(jié)直腸癌細(xì)胞株中，miR-200c表達(dá)水平對(duì)5-FU化學(xué)敏感

3、性的影響及其可能的作用機(jī)制。
　　方法:
　　1實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)SW620、SW480、HCT116、HT29、HCT8細(xì)胞中內(nèi)源性miR-200c的表達(dá)水平;
　　2 Target Scan和miRBase數(shù)據(jù)庫查找miR-200c可能的與耐藥相關(guān)的下游靶基因;
　　3分別將miR-200c類似物或抑制物及其相應(yīng)的陰性對(duì)照物轉(zhuǎn)染結(jié)腸癌SW620細(xì)胞、HCT116細(xì)胞。轉(zhuǎn)染24h后，再分別加入1000μg/

4、mL與568μg/mL的5-FU作用24 h，MTS及流式細(xì)胞術(shù)分別檢測(cè)并計(jì)算轉(zhuǎn)染后5-FU的半數(shù)抑制濃度(half inhibition concentration，IC50)的變化及細(xì)胞凋亡的改變;結(jié)腸癌SW620細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-200c類似物、抑制物及其相應(yīng)的陰性對(duì)照物48h后，再加入1000μg/mL的5-FU作用8h，Western blotting檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞中PTEN(phosphataseand tensin homo

5、logy deleted on chromosome ten)、p-Akt(phosoho-Akt，磷酸化Akt)、Akt表達(dá)的變化。
　　結(jié)果:
　　1 miR-200c在5株細(xì)胞株中表達(dá)水平不同，在SW620、HCT116細(xì)胞中的表達(dá)水平相對(duì)居于中位;
　　2 PTEN、PPP2CA（protein phosphatase2A，蛋白質(zhì)磷酸酶2A）、PPP2R1B（protein phosphatase2 regul

6、atory subunit A beta，蛋白質(zhì)磷酸酶2調(diào)節(jié)亞基1B）、SOCS6(suppressor ofcytokine signaling6，細(xì)胞因子信號(hào)抑制因子6)、A20(TNFAIP3)（tumor necrosis factor alpha-induced protein3，腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白3）為miR-200c可能直接調(diào)控的靶基因并且與耐藥密切相關(guān);
　　3 miR-200c類似物組對(duì)5-FU的IC50顯著

7、高于相應(yīng)陰性對(duì)照組(P均＜0.05);相反，miR-200c抑制物組對(duì)5-FU的IC50顯著低于相應(yīng)的陰性對(duì)照組(P＜0.05)。
　　4 miR-200c類似物組與相應(yīng)的陰性對(duì)照組相比，降低了5-FU促細(xì)胞凋亡的作用（P均＜0.05）;相反，miR-200c抑制物組與相應(yīng)的陰性對(duì)照組相比，提高了5-FU促細(xì)胞凋亡作用(P＜0.05)。
　　5 miR-200c類似物組PTEN蛋白表達(dá)水平顯著低于相應(yīng)的陰性對(duì)照組，而p-Ak