過表達TRIM11對結(jié)直腸癌DLD-1細胞5-FU敏感性的影響.pdf

1、目的：
　　初步探究TRIM11在結(jié)直腸癌組織或細胞內(nèi)表達情況，及其對5-FU敏感性的影響。
　　方法：
　　1.收集結(jié)直腸癌患者術(shù)后新鮮癌組織及其對應癌旁正常組織標本，選用qRT-PCR（熒光定量PCR）檢測TRIM11mRNA的表達量。
　　2.分別培養(yǎng)11種結(jié)直腸癌細胞株，選用qRT-PCR檢測各腫瘤細胞內(nèi)TRIM11mRNA的表達量。
　　3.構(gòu)建 pSin-TRIM11質(zhì)粒載體，利用慢病毒轉(zhuǎn)導技術(shù)

2、轉(zhuǎn)染結(jié)直腸癌細胞DLD-1，構(gòu)建過表達 TRIM11細胞系（即DLD-1-TRIM11組），轉(zhuǎn)染pSin/neo為空白質(zhì)粒對照組（即DLD-1-vector組），最后通過 western blot鑒定DLD-1-TRIM11組TRIM11蛋白被成功過表達。
　　4. DLD-1-TRIM11組和DLD-1-vector組分別加入不同濃度5-FU處理24h后，行CCK-8檢測細胞活力。
　　5.150ug/ml的5-FU分別作

3、用兩組細胞24h后，行流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡率。
　　6.利用生物信息學軟件TargetScan對TRIM11調(diào)控的miRNAs進行預測。
　　結(jié)果：
　　1.組織qRT-PCR顯示：7例組織標本中，有5例TRIM11mRNA表達量在結(jié)直腸癌組織中顯著低于其對應癌旁正常組織（P<0.05）。
　　2.細胞qRT-PCR顯示:在11種結(jié)直腸癌細胞株中，TRIM11mRNA表達量各不相同，其中HT29表達量最高，而D

4、LD-1表達量最低。
　　3.與DLD-1-vector組比較，TRIM11蛋白水平在DLD-1-TRIM11組細胞中顯著性提高（P<0.05）。
　　4.CCK-8結(jié)果顯示：DLD-1-TRIM11組細胞活力顯著低于 DLD-1-vector組（P<0.05），DLD-1-TRIM11組半數(shù)抑制率（IC50=13.94ug/ml）明顯低于DLD-1-vector組（IC50=110.24 ug/ml）。
　　5.流式

5、細胞術(shù)結(jié)果顯示：DLD-1-TRIM11組細胞凋亡率明顯高于DLD-1-vector組（P<0.05）。
　　6.TargetScan軟件預測：miR-9也許能靶向調(diào)控TRIM11。
　　結(jié)論：
　　1.利用慢病毒轉(zhuǎn)導技術(shù)轉(zhuǎn)染結(jié)直腸癌細胞DLD-1，pSin-TRIM11質(zhì)粒載體能顯著性提高TRIM11的蛋白表達。
　　2.在結(jié)直腸癌細胞 DLD-1中過表達 TRIM11時，可能提高 DLD-1細胞對5-FU的敏