MK-ASODN增強絨毛膜癌細胞對5-FU化療敏感性的研究.pdf

1、目的:初步探討中期因子(Midkine，MK)的反義寡核苷酸片段(Antisense Oligodeoxynucleotides，ASODN)在5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil，5-FU）對絨毛膜癌（choriocarcinoma，絨癌）細胞化療中的增敏作用，并進一步研究其增敏效應的相關(guān)機制。
　　 方法:1.化學合成MK-ASODN及相應對照的無義寡核苷酸片段(Nonsense Oligodeoxynucleotid

2、es，NSODN)，以脂質(zhì)體為載體轉(zhuǎn)染絨癌JEG-3細胞，并以RT-PCR檢測轉(zhuǎn)染效果。
　　 2.用MTS比色分析法觀察5-FU對MK-ASODN實驗組與MK-NSODN對照組絨癌JEG-3細胞的生長抑制情況。
　　 3.用Anexin V-FITC雙染流式檢測凋亡試驗觀察MK-ASODN實驗組和MK-ASODN+5-FU聯(lián)合實驗組以及相應對照組絨癌JEG-3細胞的凋亡情況。
　　 4.用Western blo

3、t檢測MK-ASODN+5-FU聯(lián)合實驗組與相應對照組絨癌JEG-3細胞PI3K/Akt信號通路磷酸化PI3K(p-PI3K)、磷酸化Akt(p-Akt)及其下游的Bcl-2蛋白水平。
　　 結(jié)果:1.相比于對照組，轉(zhuǎn)染MK-ASODN后可明顯下調(diào)MKmRNA表達水平。
　　 2.在同樣的5-FU濃度下，MK-ASODN實驗組絨癌JEG-3細胞的生長抑制率均明顯高于其對照組;MK-ASOND下調(diào)MK表達能增加絨癌JEG-

4、3細胞對5-Fu的化療敏感性，與對照組相比，IC50值由54.83±4.86mg/L降為35.69±3.04mg/L(p＜0.05)。
　　 3.MK-NSODN對照組與MK-ASODN實驗組兩組絨癌JEG-3細胞總凋亡率分別為0.54±0.10％和0.09±0.03％，其中早期凋亡率分別為0.27±0.09％和0.04±0.01％(p＜0.05); MK-ASODN使5-FU誘導的絨癌JEG-3細胞總凋亡率由28.99±2.0

5、4％增加到49.14±4.12％(p＜0.05)，其中早期凋亡率增加顯著，由16.63±2.45％增加38.28±4.41％(p＜0.05);
　　 4.MK-ASODN聯(lián)合5-FU可下調(diào)PI3K/Akt活性(p-PI3K，p-Akt)及其下游的Bcl-2的蛋白表達水平。
　　 結(jié)論:1.絨癌JEG-3細胞轉(zhuǎn)染MK-ASODN后能下調(diào)MKmRNA表達。
　　 2.MK-ASODN使5-FU作用于絨癌JEG-3細胞