YAP蛋白在乳腺癌細(xì)胞放射感性調(diào)節(jié)作用的研究.pdf

1、放射治療是乳腺癌治療的重要手段之一，它不僅明顯提高了局部腫瘤控制率，而且提高了患者的遠(yuǎn)期生存率。但是由于一部分乳腺癌細(xì)胞具有輻射抗性，限制了放射治療的療效，從而導(dǎo)致腫瘤局部復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。Hippo通路在果蠅和哺乳動(dòng)物中對(duì)器官的大小和腫瘤的生長(zhǎng)發(fā)揮關(guān)鍵作用。該通路的下游效應(yīng)因子是YAP(Yes-associated protein，果蠅中的同源物是Yki)，其作為輔激活因子，與轉(zhuǎn)錄因子TEADs結(jié)合調(diào)控Hippo通路下游靶基因的表達(dá)，從而影

2、響腫瘤細(xì)胞的增殖、分化，腫瘤大小及預(yù)后。本研究重點(diǎn)深入系統(tǒng)研究了Hippo-YAP信號(hào)通路降低乳腺癌細(xì)胞輻射敏感性的作用及其分子機(jī)制。主要結(jié)果和發(fā)現(xiàn)如下:
　　第一部分:YAP蛋白對(duì)乳腺癌細(xì)胞放射增敏作用
　　為了探討YAP對(duì)乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231轉(zhuǎn)移和放射敏感性的影響，利用pCMV-YAP，si-RNA轉(zhuǎn)染法將YAP pCMV質(zhì)粒和RNA干擾片段轉(zhuǎn)入MDA-MB-231細(xì)胞，Western blot法檢測(cè)YAP、B

3、CL-2蛋白表達(dá)水平，transwell法和細(xì)胞劃痕法檢測(cè)細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力，集落形成法檢測(cè)細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)。結(jié)果表明，成功構(gòu)建了YAP低表達(dá)的MDA-MB-231細(xì)胞株;YAP低表達(dá)明顯抑制細(xì)胞的轉(zhuǎn)移;細(xì)胞受γ線照射后，YAP低表達(dá)使細(xì)胞放射敏感性增強(qiáng)，凋亡細(xì)胞比例增多，同時(shí)BCL-2表達(dá)明顯降低。提示YAP低表達(dá)可明顯抑制細(xì)胞轉(zhuǎn)移;YAP低表達(dá)使細(xì)胞輻射敏感性增加很可能與下調(diào)BCL-2蛋白水平，促進(jìn)凋亡有關(guān)。
　　第二部分:電離輻射對(duì)乳

4、腺癌細(xì)胞YAP蛋白及其磷酸化蛋白的影響
　　乳腺癌細(xì)胞MCF-7，MDA-MB-231細(xì)胞系作為研究對(duì)象。兩組細(xì)胞經(jīng)過2、4、6、8和10Gy劑量γ射線照射后，細(xì)胞活力均有下降。兩組細(xì)胞相比較，MCF-7細(xì)胞比MDA-MB-231細(xì)胞活力下降的幅度更大，故MCF-7對(duì)電離輻射更敏感;兩組細(xì)胞在0、2、4、6Gy照射24h后，YAP蛋白表達(dá)含量變化不明顯，但是磷酸化的YAP(p-YAP)蛋白在照射劑量≥4Gy時(shí)有不同程度的升高。給予