PTHrP調(diào)節(jié)乳腺癌生長(zhǎng)及癌細(xì)胞與骨細(xì)胞相互作用研究.pdf

1、分類密學(xué)位類別：科學(xué)學(xué)位團(tuán)專業(yè)學(xué)位口學(xué)校代碼：學(xué)號(hào)：學(xué)科門類：100622010601037100102昊肄簣斜囊等鬻萋纛瓣鹱i辯熊蘩豢l蠡#鼉I耄謦鼗瓣l糕萋鬟蒸l科博士學(xué)位論文DoCToRALDISSERTATIoN論文題目：PTHrP調(diào)節(jié)乳腺癌生長(zhǎng)及癌細(xì)胞與骨細(xì)胞相互作用研究TITLERoleoftumorderivedPTHrPinbreastcancergrowthandprogressionandtumormediatedo

2、steoblastinhibitionandosteoclastactivationandbonedestruction一級(jí)學(xué)科：基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)二級(jí)學(xué)科：免疫學(xué)論文作者：鄭璐指導(dǎo)教師：姚智導(dǎo)師組成員：肖國(guó)芝天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二。一三年五月天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文中文捅要乳腺癌是一種常見的、高發(fā)的惡性腫瘤，在女性惡性病發(fā)病率中排名第一位，是導(dǎo)致全球女性死亡的主要原因；經(jīng)研究表明，在全球范圍內(nèi)，每年約有50萬(wàn)新增病例，約有25萬(wàn)人死于乳腺癌。乳

3、腺癌在其發(fā)生的初期階段，往往只單純的表現(xiàn)為細(xì)胞的過(guò)度增殖及凋亡的異常減少，最終導(dǎo)致腫瘤的快速生長(zhǎng)；在其發(fā)生發(fā)展的晚期階段，轉(zhuǎn)移成為導(dǎo)致病人死亡的一個(gè)最重要的因素，而骨是乳腺癌轉(zhuǎn)移中最常見的靶器官。PTHrP是從高鈣血癥相關(guān)的惡性腫瘤組織中分離出來(lái)的一種蛋白質(zhì)，由于其結(jié)構(gòu)及功能與甲狀旁腺激素PTH相類似而得名；多項(xiàng)研究表明PTHrP在乳腺癌微環(huán)境中呈現(xiàn)過(guò)度表達(dá)的狀態(tài)，它通過(guò)上調(diào)骨組織中成骨細(xì)胞及基質(zhì)細(xì)胞RANKL的表達(dá)，抑制0PG的表達(dá)，

4、RANKL與破骨細(xì)胞RANK結(jié)合從而間接激活破骨細(xì)胞，誘導(dǎo)其分化成熟；PTHrP在腫瘤溶骨性骨轉(zhuǎn)移及骨破壞的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著至關(guān)重要的作用，同時(shí)也有報(bào)道稱其與乳腺癌的預(yù)后有一定的關(guān)聯(lián)性。研究目的探討乳腺癌細(xì)胞自身產(chǎn)生的細(xì)胞因子PTHrP對(duì)成骨細(xì)胞增殖與分化的影響；對(duì)破骨細(xì)胞增殖及分化的影響；對(duì)腫瘤細(xì)胞自身增殖，凋亡及自噬作用的影ⅡI匈。研究?jī)?nèi)容及方法本課題采用慢病毒包裝的shRNA感染乳腺癌細(xì)胞系MDA—MB一231并用嘌呤霉素篩選的

5、方法，通過(guò)RTPCR及E1isa檢測(cè)，得到穩(wěn)定敲降PTHrP的細(xì)胞株995，996以及陰性對(duì)照組細(xì)胞NC。體外通過(guò)成骨分化標(biāo)志分子OCN／OSX／Runx2／ALP／BSP相對(duì)表達(dá)量檢測(cè)，破骨分化標(biāo)志分子CatK／RANK／Trap／MMP一9相對(duì)表達(dá)量檢測(cè)，ALP活性檢測(cè)，茜素紅礦化染色，Trap染色等方法，觀察NC，995，996三種細(xì)胞的條件培養(yǎng)基對(duì)成骨細(xì)胞及破骨細(xì)胞增殖及分化影響的差別；體內(nèi)通過(guò)影像學(xué)X射線平片，免疫組化等檢測(cè)手

6、段，觀察Balb／C裸鼠脛骨內(nèi)注射NC，995，996三種細(xì)胞以及空白對(duì)照Blank28天后對(duì)成骨細(xì)胞及破骨細(xì)胞影響的差別；體外通過(guò)流式細(xì)胞周期分析，細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Caspase8／bcl2相對(duì)表達(dá)量檢測(cè)，細(xì)胞自噬標(biāo)志蛋白LC3A／B／Beclinl相對(duì)表達(dá)量檢測(cè)，透射電鏡，CCK一8法細(xì)胞增殖曲線檢測(cè)等方法，觀察NC，995，996三種細(xì)胞體外增殖，凋亡及白噬作用的差異；體內(nèi)通過(guò)NC，995，996三種細(xì)胞Balb／C裸鼠皮下成瘤瘤