版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)
文檔簡介
1、目的:腫瘤抑制基因p53在1979年被首次報道,是迄今為止發(fā)現(xiàn)的與人類腫瘤相關(guān)性最高的基因。野生型p53蛋白在調(diào)節(jié)細胞生長,抑制惡性腫瘤發(fā)展中起著重要的作用。近年有學者發(fā)現(xiàn)了兩個基因p63和p73,它們與p53基因在結(jié)構(gòu)上高度同源,功能上也存在著非常復雜的關(guān)系,這一類基因稱為p53基因家族,但其功能尚不完全明了。14-3-3σ是14-3-3基因家族中唯一一個能夠被DNA損傷所誘導的成員。作為細胞周期負調(diào)控因子,14-3-3σ的活化可以使
2、細胞周期停滯于G2期,抑制細胞的生長。本研究采用多種不同的實驗方法,研究了不同p53狀態(tài)的乳腺癌細胞系中p73α與14-3-3σ的基因表達情況,及p73α與14-3-3σ在基因水平上的相互調(diào)節(jié)作用。目的在于探索p73α與14-3-3σ在細胞增殖及癌變中的作用,及p73α與14-3-3σ之間的相互關(guān)系。 方法:本研究選用p53野生型人類乳腺癌細胞系MCF-7,p53突變型人類乳腺癌細胞系MDA-MB-453,MDA-MB-231,
3、MDA-MB-436,p53缺失型人類乳腺癌細胞系MDA-MB-157,以及模式細胞SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細胞系COS-7,p53缺失型人類肺癌細胞系H1299,通過MTT分析,RT-PCR,Westernblot和免疫沉淀的方法研究在MDA-MB-436細胞系中,突變的p53對阿霉素(adrimycin,ADR)誘導DNA損傷產(chǎn)生的應答反應;通過基因轉(zhuǎn)染,研究MDA-MB-436細胞系中,p73α對p53有否替代作用,能否誘導p53
4、的下游基因14-3-3σ的表達;然后又運用基因克隆,熒光素酶報告劑分析以及克隆形成實驗的方法研究p73α和14-3-3σ之間的相互作用及關(guān)系。 結(jié)果:1MTT分析結(jié)果:五種乳腺癌細胞系,在ADR(1μM)分別處理24小時和48小時后,p53野生型的MCF-7的細胞生存率分別為50.20%和16.58%;p53突變型的MDA-MB-453的細胞生存率分別為58.87%和9.61%;p53突變型的MDA-MB-231的細胞生存率分別
5、為77.09%和34.25%;p53缺失型的MDA-MB-157的細胞生存率分別為85.50%和12.48%;而p53突變型的MDA-MB-436的細胞生存率分別為99.20%和98.62%。 2ADR處理前后14-3-3σ的表達狀況:ADR(1μM)處理24小時以后,14-3-3σ的基因轉(zhuǎn)錄水平和蛋白表達水平在MCF-7,MDA-MB-453和MDA-MB-231細胞系中均升高;而在MDA-MB-436細胞系中為降低;在MDA
6、-MB-157細胞系中沒有發(fā)現(xiàn)14-3-3σ的表達。 3p73α在MDA-MB-436細胞系中的表達:在MDA-MB-436細胞系中沒有發(fā)現(xiàn)p53蛋白的表達,而p73α的轉(zhuǎn)錄水平和蛋白表達水平在ADR(1μM)處理24小時以后均輕度上調(diào)。 4轉(zhuǎn)染p73α對14-3-3σ表達的影響:在MDA-MB-436細胞系中,轉(zhuǎn)染進外源性的p73α之后,14-3-3σ的基因轉(zhuǎn)錄水平和蛋白表達水平均呈現(xiàn)大幅度升高。 6轉(zhuǎn)染14-
7、3-3σ對p73α的影響:熒光素酶報告劑分析顯示,在H1299細胞系中,跟內(nèi)參照相比,單獨轉(zhuǎn)染25ng的p73α可以使Bax和p21WAF1的轉(zhuǎn)錄活性分別增加5.688倍和9.061倍;共轉(zhuǎn)染恒定量(25ng)的p73α和逐漸增加量(100ng,200ng,400ng)的14-3-3σ之后,Bax的轉(zhuǎn)錄活性和內(nèi)參照相比分別高出7.734,12.143,27.085倍,p21WAF1的轉(zhuǎn)錄活性和內(nèi)參照相比分別高出12.678,15.829
8、,15.191倍;單獨轉(zhuǎn)染400ng的14-3-3σ之后,Bax和p21WAF1的轉(zhuǎn)錄活性和內(nèi)參照相比基本沒有變化。RT-PCR結(jié)果也顯示,在H1299細胞系中,共轉(zhuǎn)染p73α和14-3-3σ之后,p21WAF1和Bax的轉(zhuǎn)錄活性比單獨轉(zhuǎn)染p73α時的轉(zhuǎn)錄活性高。在H1299細胞系中,共轉(zhuǎn)染p73α和14-3-3σ之后,p73α的表達水平比單獨轉(zhuǎn)染p73α時高。在MDA-MB-436細胞系中,共轉(zhuǎn)染p73α和14-3-3σ之后,細胞的死
9、亡程度比單獨轉(zhuǎn)染p73α后的死亡程度高。 結(jié)論:1五種乳腺癌細胞系的MTT分析結(jié)果顯示,p53野生型的MCF-7,p53突變型的MDA-MB-453,MDA-MB-231,p53缺失型的MDA-MB-157對ADR誘導的DNA損傷敏感或中度敏感,而p53突變型的MDA-MB-436細胞系對ADR誘導的DNA損傷不產(chǎn)生應答;同時p53蛋白在MDA-MB-436細胞系中不表達;ADR處理后,14-3-3σ在MDA-MB-436細胞系
10、中的表達水平下降。提示,在MDA-MB-436細胞系中,突變后的p53不能對ADR誘導的DNA損傷產(chǎn)生應答,從而不能調(diào)節(jié)細胞周期和啟動細胞凋亡。 2在MDA-MB-436細胞系中,ADR處理后p73α的表達水平輕度上調(diào)。而在轉(zhuǎn)染外源性的p73α之后,14-3-3σ的表達水平大幅度升高。提示:p73α可以代替p53,在p53突變的MDA-MB-436細胞系中誘導14-3-3σ的表達。 3在H1299細胞系中,共轉(zhuǎn)染p73α
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- P73α和14-3-3σ在乳腺癌中的表達及其相互關(guān)系的實驗研究.pdf
- 乳腺癌細胞中MDM2調(diào)控p73α與ERα相互作用.pdf
- 乳腺癌中P73α與Erα的相互調(diào)控.pdf
- BAMBI在乳腺癌細胞系中的分布與表達.pdf
- p73α和14-3-3σ抑制乳腺腫瘤生長的體內(nèi)實驗研究.pdf
- 乳腺良、惡性組織中p73α和14-3-3σ的表達及其與臨床生物學行為關(guān)系的研究.pdf
- GSK3β在乳腺癌細胞系中的表達及其與P38MAPK相關(guān)性的研究.pdf
- 乳腺癌p73基因雜合性缺失及其蛋白表達的研究.pdf
- p73和p53在乳腺癌中的表達及臨床意義.pdf
- 28595.hsp27與pimt在乳腺癌細胞中的相互作用研究
- 棉花14-3-3蛋白在纖維發(fā)育中的功能表達和相互作用研究.pdf
- p73基因、p51基因在乳腺癌組織中的表達及意義.pdf
- 14-3-3ζ的表達與乳腺癌發(fā)生發(fā)展相關(guān)性的研究.pdf
- Rictor與PKCζ相互作用及調(diào)節(jié)乳腺癌細胞轉(zhuǎn)移的研究.pdf
- 乳腺癌細胞系分泌組學研究.pdf
- PTHrP調(diào)節(jié)乳腺癌生長及癌細胞與骨細胞相互作用研究.pdf
- 蛋白質(zhì)ADAM22與14-3-3相互作用及其在細胞粘附和細胞伸展中的作用.pdf
- 朊蛋白與信號蛋白14-3-3β相互作用的研究.pdf
- SIRT3基因在乳腺癌中的表達及其對乳腺癌細胞增殖能力的影響.pdf
- RILP通過與RaIGDS相互作用調(diào)控乳腺癌細胞的遷移與侵襲.pdf
評論
0/150
提交評論