乳腺良、惡性組織中p73α和14-3-3σ的表達(dá)及其與臨床生物學(xué)行為關(guān)系的研究.pdf

1、目的：乳腺癌是嚴(yán)重威脅婦女健康的一種惡性腫瘤。據(jù)統(tǒng)計，全球每年約有120萬～140萬婦女患乳腺癌，約有50萬患者死于該病。近年來，我國婦女乳腺癌的發(fā)病率以年增長3％的速度逐年遞增。研究表明，乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展是多步驟、多基因作用的結(jié)果。隨著乳腺癌發(fā)病率的不斷增加，對其易感基因、相關(guān)基因及其產(chǎn)物的研究已成為腫瘤學(xué)關(guān)注的熱點問題。本研究采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reversetranscription-polymerase chain rea

2、ction，RT-PCR)技術(shù)和免疫組織化學(xué)鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化酶法(streptavidinperoxdase coniugated method，S-P)分別從轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平檢測抑癌基因p73α和細(xì)胞周期負(fù)調(diào)節(jié)因子14-3-3σ在乳腺正常組織、癌旁組織和癌組織中的表達(dá)情況與相互作用；結(jié)合回顧性分析乳腺癌組織p73α和14-3-3σ的表達(dá)與其臨床生物學(xué)行為的關(guān)系，為乳腺癌的早期發(fā)現(xiàn)和靶向治療提供新的分子生物學(xué)指標(biāo)和靶點。

3、 方法：采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reversetranscription-polymerase chain reaction，RT-PCR.)技術(shù)和免疫組織化學(xué)鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化酶法(streptavidinperoxdase conjugated method，S-P)分別從轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平檢測抑癌基因p73α和細(xì)胞周期負(fù)調(diào)節(jié)因子14-3-3σ在乳腺正常組織、癌旁組織和癌組織中的表達(dá)情況與相互作用，并回顧性分析乳腺癌組織

4、p73α和14-3-3σ、組織學(xué)分級、腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況、有否脈管瘤栓、ER/PR、HER-2)的關(guān)系。結(jié)果： 1.p73α基因在乳腺正常組織、癌旁組織和癌組織中的表達(dá)1.1 p73α基因的mRNA水平表達(dá) 33例乳腺正常組織中，有25例p73α基因陽性表達(dá)，陽性率75.8％；33例癌旁組織中22例表達(dá)，陽性率66.7％；33例乳腺癌組織中20例表達(dá)，陽性率60.6％。乳腺正常組織、癌旁組織和癌組織中p73α基因的矯正值(p73a

5、/GAPDH)分別為0.8378±0.5921、0.9199±0.8441和0.6150±0.3756，經(jīng)過統(tǒng)計學(xué)處理，三組之間無統(tǒng)計學(xué)差異(F=1.139，p=0.326)。 1.2 p73α基因的蛋白表達(dá)33例乳腺正常組織中25例呈現(xiàn)p73α蛋白陽性表達(dá)，陽性率75.8‰33例癌旁組織中30例表達(dá)，陽性率90.9％；33例乳腺癌組織中10例表達(dá)，陽性率30.3％。經(jīng)過統(tǒng)計學(xué)處理，三組中癌組織和癌旁組織、正常組織間蛋白表達(dá)有顯

6、著差異(x2= 17.860，p=0.000：x2=8.726，p=0.003)，而癌旁組織和正常組織間無統(tǒng)計學(xué)差異(x2=3.38 5,p=0.066)。 2.14-3-3σ在乳腺正常組織、癌旁組織和癌組織中的表達(dá)2.1 14-3-3σ的mRNA水平表達(dá) 33例乳腺正常組織中14-3-3σ全部表達(dá)；33例癌旁組織中32例表達(dá)，陽性率97.0‰33例乳腺癌組織中，33例表達(dá)，陽性率100％。乳腺正常組織、癌旁組織和癌組織中14-

7、3-3σ矯正值( 14-3-3σ/GAPDH)分別為2.8231±0.1973、2.1950±0.1864和1.4680±0.0840。癌組織與癌旁組織、癌旁組織和正常組織之間14-3-3σ表達(dá)沒有明顯差異(p=0.075，p=0.123)；但癌組織中14-3-3σ基因表達(dá)水平明顯低于乳腺正常組織，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=5.640，p=0.005)。 2.2 14-3-3σ的蛋白水平表達(dá)33例乳腺正常組織中18例強(qiáng)陽性表達(dá)，陽性率為5

8、4.5％；33例癌旁組織中1 1例強(qiáng)陽性表達(dá)，陽性率33.3％；33例乳腺癌組織中6例強(qiáng)陽性表達(dá)，陽性率18.2％。14-3-3σ的蛋白表達(dá)水平與細(xì)胞增殖呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-3.093，p=0.003)；其中，正常組織和癌組織、癌旁和癌組織之間表達(dá)水平有明顯差異(χ2=14.029，p=0.000；χ2=6.344，p=0.012)，但正常和癌旁組織之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=2.752，p=0.097)。 3.p73α蛋白表達(dá)

9、與臨床參數(shù)的關(guān)系76例入組患者中，病理有脈管瘤栓組p73α蛋白表達(dá)陽性率為16.7％(4/24)，而無瘤栓組為40.4％(21/52)，有統(tǒng)計學(xué)差異(χ2=4.185，p=0.034)。ER陽性&PR陽性組患者中，p73α蛋白表達(dá)陽性率72.7％(16/22)，而ER陰性&PR陰性組中，陽性表達(dá)率為33.3％(8/24)，ER陽性＆PR陰性/ER陰性＆PR陽性組中僅1例表達(dá)陽性，占3.3％(1/30)，經(jīng)過統(tǒng)計學(xué)分析，三組間兩兩比較均有

10、顯著差異(χ2=27.692，p=0.007)。p73α蛋白陽性表達(dá)與其他臨床參數(shù)：臨床分期(χ2=0.217，p=0.887)、有否腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(χ2=0.007，p=0.564)、腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目(χ2=0.002，p=0.579)、腫瘤大小(χ2=0.953，p=0.329)、病理類型(χ2=1.907，p=0.167)、組織學(xué)分級(χ2=0.02，p=0.888)、HER-2過表達(dá)(χ2=1.93 1，p=0.126)無顯著相關(guān)

11、。 4 14-3-3σ蛋白表達(dá)與臨床參數(shù)的關(guān)系隨著組織學(xué)分級的增高，14-3-3σ蛋白表達(dá)強(qiáng)陽性率降低，兩者呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.369，x2=6.133，p=0.013)；HER-2蛋白高表達(dá)(+++)者中，14-3-3σ蛋白表達(dá)強(qiáng)陽性率為16.8％(8/48)，低表達(dá)組中，14-3-3σ蛋白表達(dá)強(qiáng)陽性者為44.4％(12/28)，兩組有統(tǒng)計學(xué)差異(x2=6.173，p=0，014)；14-3-3σ蛋白表達(dá)狀況和病理組織學(xué)類

12、型(x2=1.462，p=0.227)、有否腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(x2=1.373，p=0.179)、腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目(x2=0.468，p=0.349)、有否脈管瘤拴(x2=1.684，p=0.154)、腫瘤大小(x2=1.317，p=0.251)、臨床分期(x2=0.079，p=0.779)、雌孕激素受體狀態(tài)(x2=0.044，p=0.834)之間的關(guān)系無統(tǒng)計學(xué)差異。 5 p53基因突變?nèi)橄侔┙M織中14-3-3σ與p73α的相互關(guān)系

13、76例乳腺癌患者中，p53蛋白表達(dá)陽性者45例，占59.2％。在45例p53基因突變?nèi)橄侔┲?，p73α蛋白表達(dá)陽性且14-3-3σ表達(dá)陽性者占61.1％(11/18)，p73α蛋白表達(dá)陰性且14-3-3σ表達(dá)陰性者占78.6％(22/28)，兩者呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.384，x2=6.490，p=0.013)。 6 乳腺癌組織中p53與p73α蛋白表達(dá)的相互關(guān)系p53蛋白表達(dá)陽性組中，p73α蛋白陽性表達(dá)率為42.2％(19/4

14、5)，而p53蛋白表達(dá)陰性組中，p73α蛋白陽性表達(dá)率僅為19.4％(6/31)，兩者呈正相關(guān)(r=0.239，x2=4.919，p=0.027)。 結(jié)論： 1.p73α基因在乳腺正常組織和良性組織中表達(dá)明顯高于癌組織，p73α蛋白高表達(dá)與乳腺腫瘤組織脈管瘤栓呈負(fù)相關(guān)，且多見于ER陽性＆PR陽性患者。提示作為抑癌基因，p73α基因表達(dá)的衰減與乳腺腫瘤的形成和發(fā)展相關(guān)。 2 乳腺組織由正常到增生到癌變過程中，細(xì)胞周期負(fù)調(diào)控