FOXO3a異常表達(dá)與胃癌生物學(xué)行為和臨床病理特征關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分 FOXO3a在胃癌組織中的表達(dá)與胃癌患者臨床病理特征的相關(guān)性研究
　　目的:檢測(cè)FOXO3a在胃癌組織中的表達(dá)，并分析FOXO3a的表達(dá)程度與胃癌患者臨床病理特征的相關(guān)性。方法:收集2006～2008年在復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院接受胃癌根治術(shù)的患者的胃癌組織標(biāo)本共150例制成組織芯片，進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色。根據(jù)FOXO3a在胃癌組織中的染色強(qiáng)度和染色面積將上述患者分為FOXO3a高表達(dá)組和低表達(dá)組，分析兩組患者在年齡、性別、

2、腫瘤部位、分化程度、浸潤(rùn)深度、是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、脈管侵犯和神經(jīng)侵犯等方面的差別。結(jié)果:150例患者中男性109例，女性41例，平均年齡61.2歲。95例胃癌組織高表達(dá)FOXO3a，占63.3％。FOXO3a高表達(dá)與胃癌浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、血管侵犯及患者TNM分期呈正相關(guān)，但與患者年齡、性別、腫瘤部位、腫瘤分化程度及神經(jīng)侵犯無相關(guān)性。結(jié)論:FOXO3a在胃癌組織中高表達(dá)，其表達(dá)量與患者腫瘤浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移程度、血管侵犯及

3、TNM分期呈正相關(guān)，可能成為胃癌患者的負(fù)性預(yù)測(cè)因子。
　　第二部分 FOXO3a異常表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞株增殖、遷移、侵襲和化療藥物敏感性的影響
　　目的:通過慢病毒載體靶向抑制FOXO3a基因，探討FOXO3a異常表達(dá)對(duì)胃低分化腺癌細(xì)胞株AGS增殖、遷移、侵襲和化療藥物敏感性的影響。方法:利用FOXO3a慢病毒干擾載體和空載體感染AGS細(xì)胞株，分別構(gòu)建AGS-FOXO3a-shRNA干擾株和AGS-negative-shRNA對(duì)

4、照株。MTT法測(cè)定細(xì)胞增殖，劃痕試驗(yàn)檢測(cè)遷移能力，Transwell試驗(yàn)檢測(cè)侵襲能力。Western blot測(cè)定細(xì)胞內(nèi)Cathepsin D和Cathepsin L蛋白的表達(dá)水平。上述細(xì)胞系與不同濃度的伊立替康、奧沙利鉑、紫杉醇共培養(yǎng)48小時(shí)，MTT法測(cè)定48小時(shí)細(xì)胞抑制率，計(jì)算IC50和RI;流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同化療藥物對(duì)細(xì)胞凋亡的影響，Western blot檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)。結(jié)果:轉(zhuǎn)染FOXO3a-shRNA可有效降低AGS

5、-FOXO3a-shRNA細(xì)胞株內(nèi)FOXO3a mRNA和蛋白的表達(dá)。同對(duì)照株相比，AGS-FOXO3a-shRNA的細(xì)胞增殖未受到明顯影響，但遷移和侵襲能力明顯下降，同時(shí)細(xì)胞內(nèi)成熟型Cathepsin D、Cathepsin L的蛋白表達(dá)水平均較對(duì)照株明顯降低。AGS-FOXO3a-shRNA對(duì)伊立替康和奧沙利鉑的敏感性明顯上升，流式細(xì)胞儀檢測(cè)到在伊立替康和奧沙利鉑作用48小時(shí)后，AGS-FOXO3a-shRNA細(xì)胞的凋亡百分比顯著高

6、于對(duì)照株，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。同時(shí)細(xì)胞內(nèi)活性Caspase-3的蛋白表達(dá)水平較對(duì)照組明顯升高，PARP-1的蛋白表達(dá)水平較對(duì)照組明顯降低，Caspase-9、Bax、Bcl-2的表達(dá)水平較對(duì)照組無明顯差異。AGS-FOXO3a-shRNA細(xì)胞在紫杉醇作用48小時(shí)后，細(xì)胞內(nèi)Caspase-3、PARP-1、Caspase-9、Bax、Bcl-2的蛋白表達(dá)水平均較對(duì)照株無明顯差異。結(jié)論:我們的實(shí)驗(yàn)證實(shí)FOXO3a-shRNA通過下調(diào)細(xì)胞內(nèi)成熟