MiRNA-362-5p對(duì)乳腺癌惡性生物學(xué)行為的影響.pdf

1、乳腺癌是婦女最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一。流行病學(xué)調(diào)查資料顯示,在美國(guó)其發(fā)病率位居第二位,而其死亡率已經(jīng)位居癌癥相關(guān)死亡率的第一位。在我國(guó),乳腺癌的發(fā)病率雖然較低,但在一些大中城市,如北京、上海,發(fā)病率呈逐年上升的趨勢(shì)。乳腺癌的發(fā)病原因至今仍不明確,目前認(rèn)為乳腺癌的發(fā)生發(fā)展與多種因素有關(guān),例如遺傳因素、內(nèi)分泌因素、乳腺良性病變惡變等。盡管目前治療手段多樣,傳統(tǒng)手術(shù)和化療等治療措施首次療效較好,但由于乳腺癌具有易復(fù)發(fā)和早期轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)行為特征

2、常導(dǎo)致治療失敗,因此深入研究乳腺癌惡性生物學(xué)行為的形成機(jī)制變得尤為重要。
　　由19-25個(gè)核苷酸組成的、非編碼的單鏈RNA被稱為微小核糖核酸(microRNA,miRNA,miR)。這類小RNA在表達(dá)上具有組織和時(shí)間的特異性,是調(diào)節(jié)其他功能基因表達(dá)的重要調(diào)控分子,在生物的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。miRNA主要通過(guò)與靶基因3’非編碼區(qū)(UTR)完全互補(bǔ)或者部分互補(bǔ)結(jié)合從而使靶基因降解或翻譯抑制,從而在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)基因的表達(dá)

3、。研究表明,多種的microRNA參與腫瘤的惡性轉(zhuǎn)變過(guò)程,如惡性增殖,復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移,凋亡抑制等。有研究報(bào)道,利用microRNA抑制劑降低乳腺癌細(xì)胞中高表達(dá)的miRNA-21后,抑制了乳腺癌細(xì)胞的增殖、遷移及腫瘤的生長(zhǎng)。這一發(fā)現(xiàn)為乳腺癌的基因治療提供的一個(gè)新的方向。本實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)探討一個(gè)新的miRNA-362-5p乳腺癌惡性生物學(xué)行為的影響,以及相關(guān)的作用機(jī)制。
　　我們?cè)趯?shí)驗(yàn)當(dāng)中首先檢測(cè)了乳腺癌細(xì)胞MCF-7、MB231與正常細(xì)胞CCD

4、-1095SK中miRNA-362-5p的表達(dá)差異,發(fā)現(xiàn)miRNA-362-5p在乳腺癌細(xì)胞中呈現(xiàn)高表達(dá)。為了探討miRNA-362-5p的高表達(dá)是否影響乳腺癌的生物學(xué)行為,我們將miRNA-362-5p的抑制劑轉(zhuǎn)染MCF-7細(xì)胞,MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖結(jié)果顯示,當(dāng)MCF-7細(xì)胞中miRNA-362-5p的表達(dá)被抑制后,細(xì)胞的增殖能力受到了明顯抑制。進(jìn)一步通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)這是由于轉(zhuǎn)染后MCF-7細(xì)胞被限制在G0期向S期轉(zhuǎn)化的進(jìn)程中,

5、而G2/M期未受明顯影響。隨后,我們通過(guò)劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell方法檢測(cè)細(xì)胞遷移,結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的遷移能力受到了明顯的抑制。Transwell方法檢測(cè)侵襲能力同樣表明實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的侵襲能力被抑制。為了進(jìn)一步驗(yàn)證miRNA-362-5p對(duì)腫瘤細(xì)胞克隆形成能力的影響,我們運(yùn)用平板克隆實(shí)驗(yàn)及軟瓊脂實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果顯示細(xì)胞的克隆形成能力明顯下降,細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的粘附能力亦受到抑制。有文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)指出,miRNA對(duì)腫瘤細(xì)胞的凋亡亦有

6、影響,因此我們利用順鉑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)來(lái)檢測(cè)其對(duì)乳腺癌細(xì)胞凋亡能力的影響,結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組的凋亡細(xì)胞數(shù)顯著高于對(duì)照組,以上這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明miRNA-362-5p的高表達(dá)有可能促進(jìn)了乳腺癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲,而抑制了其凋亡的發(fā)生。
　　在我們實(shí)驗(yàn)室前期的研究當(dāng)中發(fā)現(xiàn),在白血病細(xì)胞中miRNA-362-5p通過(guò)靶向CYLD促進(jìn)NF-κB信號(hào)通路的激活從而促進(jìn)了白血病細(xì)胞的增殖和侵襲,為了驗(yàn)證在乳腺癌細(xì)胞中miRNA-3

7、62-5p是否同樣是通過(guò)這一途徑來(lái)發(fā)揮作用的,我們將miRNA-362-5p的抑制劑及模擬物分別轉(zhuǎn)染MCF-7細(xì)胞及CCD-1095SK細(xì)胞,westernblot檢測(cè)CYLD的表達(dá)情況及NF-κB信號(hào)通路的活化情況,結(jié)果顯示在MCF-7細(xì)胞中當(dāng)miRNA-362-5p被抑制后,CYLD的表達(dá)得到了恢復(fù)而入核的NF-κB則下調(diào),在CCD-1095SK細(xì)胞中當(dāng)miRNA-362-5p的表達(dá)恢復(fù)以后,CYLD的表達(dá)下調(diào)而入核的NF-κB則上