石榴籽油抑制乳腺癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的研究.pdf

1、全球乳腺癌發(fā)病率自20世紀(jì)70年代末開始一直呈上升趨勢(shì)。由于疾病的惡性程度高，嚴(yán)重威脅女性的健康。乳腺癌已成為當(dāng)前社會(huì)的重大公共衛(wèi)生問題。在以往的食品資源開發(fā)和研究中，由于對(duì)石榴籽的認(rèn)識(shí)不足，其很少能被充分利用，近年來隨著人們對(duì)石榴籽的研究一步步的深入，發(fā)現(xiàn)石榴籽油的一些功能性成分能夠抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖，抑制瘤體的形成。
　　目的：
　　對(duì)比分析石榴籽油和其他常見油種的脂肪酸組成，找出石榴籽油可能性的功能性脂肪酸。在細(xì)胞水

2、平上通過細(xì)胞增殖抑制實(shí)驗(yàn)、凋亡實(shí)驗(yàn)和遷移侵襲實(shí)驗(yàn)，研究石榴籽油對(duì)乳腺癌細(xì)胞系惡性生物學(xué)行為的抑制作用，初步探討石榴籽油抑制乳腺癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為可能的機(jī)制，提出可能性的信號(hào)通路和靶分子。
　　方法：
　　使用氣相色譜分析儀進(jìn)行石榴籽油和其他常見油種脂肪酸組成的分析。使用MTT方法，對(duì)MCF-7/MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞進(jìn)行不同濃度的石榴籽油不同時(shí)間段的干預(yù)，分析石榴籽油對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖活性的抑制情況。并采用流式細(xì)胞術(shù)

3、分別對(duì)高、低濃度石榴籽油干預(yù)后的乳腺癌細(xì)胞進(jìn)行凋亡程度的檢測(cè)。在光學(xué)顯微鏡下拍照觀察石榴籽油干預(yù)乳腺癌細(xì)胞后細(xì)胞形態(tài)學(xué)的改變。之后使用Western blot方法對(duì)不同濃度石榴籽油干預(yù)不同時(shí)間后MCF-7/MDA-MB-231細(xì)胞中的Cox-2、Bax、Bcl-2、Caspase-3、p53等相關(guān)增殖凋亡蛋白的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。采用劃痕和transwell實(shí)驗(yàn)來觀察不同濃度石榴籽油干預(yù)MCF-7/MDA-MB-231細(xì)胞（24、48、72

4、h）后，細(xì)胞的遷移率和穿過 Matrigel膠基底膜的細(xì)胞個(gè)數(shù)的改變。對(duì)石榴籽油干預(yù)后的乳腺癌細(xì)胞，使用ELISA方法對(duì)金屬蛋白酶MMP-2、MMP-9的表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)，并用細(xì)胞免疫熒光技術(shù)檢測(cè)VEGF的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1.石榴籽油中的脂肪酸主要由石榴酸、酮酸、亞油酸、油酸、棕櫚酸、硬脂酸構(gòu)成，其中石榴酸占主要成分，約為74.41％。
　　2.與其他的常見油種脂肪酸組成相比，石榴籽油具有其他油種不具有的石

5、榴酸、酮酸，且棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸含量的所占比例均比其他油種低。
　　3.高濃度的石榴籽油干預(yù)MCF-7/MDA-MB-231細(xì)胞后，MCF-7細(xì)胞形態(tài)由團(tuán)團(tuán)緊縮狀變?yōu)榉稚顟B(tài)，MDA-MB-231細(xì)胞由長(zhǎng)梭形狀態(tài)變?yōu)閳A潤(rùn)的鋪路石狀。兩種細(xì)胞均出現(xiàn)空泡，核溶解的狀態(tài)。
　　4.石榴籽油干預(yù)MCF-7/MDA-MB-231后，不同濃度的石榴籽油對(duì)細(xì)胞的增殖抑制作用，與陰性對(duì)照組對(duì)比具有顯著性差異（p<0.05），且呈現(xiàn)

6、時(shí)間-濃度依賴性。
　　5. MCF-7/MDA-MB-231細(xì)胞經(jīng)不同濃度的石榴籽油干預(yù)96h后，能不同程度的使細(xì)胞發(fā)生凋亡（早期凋亡+晚期凋亡+死細(xì)胞），與陰性對(duì)照組相比有顯著性差異（p<0.05），且呈現(xiàn)濃度依賴性。
　　6.石榴籽油可顯著下調(diào)乳腺癌細(xì)胞中Cox-2、Bcl-2的表達(dá)水平，上調(diào)Bax、Caspase-3（cleaved）的表達(dá)水平，上調(diào)MCF-7中p53的表達(dá)水平或下調(diào)在MDA-MB-231中的表達(dá)水平

7、。
　　7.石榴籽油干預(yù)MCF-7/MDA-MB-231細(xì)胞后，同一時(shí)間點(diǎn)，石榴籽油濃度與細(xì)胞遷移率成反相關(guān)，作用72 h后，分別與對(duì)照組比較，細(xì)胞遷移率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。
　　8.石榴籽油干預(yù)MCF-7/MDA-MB-231細(xì)胞后，在同一時(shí)間點(diǎn)，石榴籽油濃度與穿過Matrigel膠基底膜的細(xì)胞個(gè)數(shù)成反相關(guān)，作用72 h后，分別與對(duì)照組比較，穿過Matrigel膠基底膜的細(xì)胞個(gè)數(shù)的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0

8、.05）。
　　9. MCF-7/MDA-MB-231細(xì)胞在石榴籽油72h干預(yù)后，能夠顯著下調(diào)MMP-2在細(xì)胞中的表達(dá)水平，石榴籽油濃度與MMP-2的表達(dá)量成反相關(guān)，與對(duì)照組相比，具有顯著性差異（p<0.05）。
　　10.經(jīng)過石榴籽油72 h干預(yù)的 MCF-7/MDA-MB-231細(xì)胞，石榴籽油可以明顯降低VEGF的表達(dá)水平，石榴籽油濃度與VEGF的表達(dá)水平成反相關(guān)。
　　結(jié)論：
　　1.石榴酸是石榴籽油主要的

9、脂肪酸組成成分，石榴酸可能是石榴籽油抑制乳腺癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的功能性脂肪酸。
　　2.石榴籽油能夠顯著抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖活性，并能夠誘導(dǎo)其凋亡。
　　3.石榴籽油抑制乳腺癌細(xì)胞增殖活性，促進(jìn)其凋亡的作用可能是通過調(diào)節(jié)細(xì)胞中Cox-2、Bcl-2、Bax、Caspase-3（cleaved）以及p53的表達(dá)水平實(shí)現(xiàn)的。
　　4.石榴籽油可以顯著抑制乳腺癌細(xì)胞遷移和侵襲的惡性生物學(xué)行為。
　　5.下調(diào)MMP-2