乳腺癌細胞中MDM2調控p73α與ERα相互作用.pdf

1、目的：
　　本課題研究人乳腺癌細胞MCF-7中MDM2調控p73α與ERα相互作用機制。
　　方法：
　　通過脂質體質粒轉染法上調p73α、ERα、MDM2表達及通過siRNA干擾下調MDM2表達，結合免疫共沉淀（Co-IP）分別檢測MDM2與p73α、ERα之間蛋白的相互結合及通過蛋白印跡（Western Blot)檢測p73α、ERα、MDM2蛋白表達情況。
　　1.免疫共沉淀法（Co-IP）檢測MDM2與E

2、Rα、p73α之間蛋白的相互結合：
　　實驗分組：第1組（PcDNA group）、第2組(p73α group)、第3組（ERα group）、第4組（p73α and ERα group）、第5組（p73α and MDM2 group），按分組轉染相應質粒，分別于18h后加入MG-132蛋白酶抑制劑作用6 h，通過抗M DM2多克隆抗體結合MDM2抗原，最后用蛋白A-瓊脂糖珠子（Protein A-Agarose）將抗原抗體

3、復合物捕獲，經(jīng)免疫印跡檢測蛋白之間相互結合。
　　2.蛋白印跡（Western Blot)檢測目的蛋白p73α、ERα、MDM2的表達：通過陽離子脂質體瞬間轉染法分別將 p73α、ERα、MDM2質粒及MDM2 siRNA按分組轉染MCF-7細胞，通過蛋白印跡法（Western Blot)分別檢測p73α、ERα、M DM2在蛋白水平的表達情況。
　　結果：
　　1、Co-IP顯示，MDM2能與p73?、ERα結合形成

4、復合體。
　　2、Western Blot顯示，MDM2能下調p73α表達及上調ERα表達。第2組（p73α group）與第7組（p73α and MDM2 group）中p73α的灰度比值（1.02±0.01,0.00±0.00 P<0.01）。第3組（ERα group）與第5組(ERα and MDM2 gro up)中ERα的灰度比值（1.15±0.02,1.37±0.06 P<0.01）。
　　3、Western

5、 Blot顯示，MDM2能下調p73α表達，降低p73α對ERα的抑制作用而上調ERα表達。第4組（p73α and ERα group）與第7組（p73α,ERα and MDM2 group）中p73α的灰度比值（0.72±0.02,0.00±0.00P<0.01），ERα的灰度比值（0.80±0.02,1.29±0.02 P<0.01）。
　　4、Western Blot顯示，MDM2 siRNA能上調p73α表達，增強p7

6、3α對ERα抑制作用而下調ERα表達。第4組（p73α and ERα group）與第5組（p73α,ERαand MDM2siRNA group）中p73α的灰度比值（0.48±0.01,1.30±0.01P<0.01），ERα的灰度比值（0.39±0.02,0.00±0.00 P<0.01）。
　　結論：
　　1. MCF-7乳腺癌細胞中MDM2蛋白能與ERα、p73α蛋白結合形成復合體。
　　2. MCF-7乳