Ad-p53對(duì)乳腺癌細(xì)胞凋亡及ER蛋白表達(dá)影響的研究.pdf

1、研究目的：
　　1.比較不同濃度Ad-p53處理后,兩種常用裂解液配方的蛋白提取效率。
　　2.研究Ad-p53對(duì)乳腺癌細(xì)胞ER表達(dá)的影響,分析不同濃度下ER表達(dá)的變化。
　　3.觀察Ad-p53對(duì)乳腺癌細(xì)胞凋亡的影響,分析不同濃度下細(xì)胞凋亡率的變化趨勢(shì)。
　　研究方法：
　　1.比較蛋白提取效率:用不同濃度Ad-p53處理MCF-7細(xì)胞48小時(shí),分別使用碧云天公司RIPA裂解液(強(qiáng))和RIPA裂解液(弱)

2、提取細(xì)胞蛋白,BCA測(cè)定蛋白濃度,進(jìn)行比較。
　　2.篩選Ad-p53對(duì)ER誘導(dǎo)作用最強(qiáng)的濃度區(qū)間:不同濃度Ad-p53(10倍)處理MCF-7細(xì)胞,饑餓培養(yǎng)48小時(shí)后,westernblot檢測(cè)ER表達(dá),選擇表達(dá)最多的濃度區(qū)間。
　　3.觀察Ad-p53誘導(dǎo)作用最強(qiáng)時(shí)ER表達(dá)的變化趨勢(shì):在選擇好的濃度范圍,不同濃度Ad-p53處理MCF-7細(xì)胞,饑餓培養(yǎng)48小時(shí),westernblot檢測(cè)ER及p53表達(dá),獲得ER及p53

3、表達(dá)隨Ad-p53濃度變化的趨勢(shì)。
　　4.觀察不同處理時(shí)間ER表達(dá)的變化:使用與3相同濃度Ad-p53處理MCF-7細(xì)胞,但饑餓培養(yǎng)時(shí)間縮短為24小時(shí),westernblot檢測(cè)ER表達(dá),比較Ad-p53對(duì)ER表達(dá)的影響效果。
　　5.觀察不同濃度Ad-p53對(duì)細(xì)胞凋亡率的影響:使用與3相同濃度的Ad-p53處理MCF-7細(xì)胞,饑餓培養(yǎng)48小時(shí),流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞凋亡。
　　結(jié)果：
　　1.不同濃度(0、10、

4、30、50、80、100MOI)Ad-p53處理后的MCF-7細(xì)胞,RIPA裂解液(強(qiáng))對(duì)目的蛋白(ER、p53)的提取效率明顯高于RIPA裂解液(弱)。
　　2.大濃度梯度(0、1、10、100、1000、10000MOI)時(shí),ER在10到100MOI時(shí)表達(dá)最多,0-10MOI表達(dá)增加,100-10000MOI表達(dá)持續(xù)減少。
　　3.在ER表達(dá)最活躍的濃度范圍(0、10、30、50、80、100MOI),p53隨著Ad-p

5、53濃度增加而增加,ER在0-80MOI表達(dá)增加,80-100明顯減少,80MOI時(shí)Ad-p53對(duì)ER表達(dá)的誘導(dǎo)作用最強(qiáng),GAPDH和Actin得到相同結(jié)果。
　　4.繼續(xù)相同濃度(0、10、30、50、80、100MOI),ER仍在80MOI表現(xiàn)表達(dá)高峰,但是增加和減少的趨勢(shì)比48小時(shí)弱。
　　5.不同濃度Ad-p53濃度下,0-50MOI細(xì)胞早期凋亡和晚期凋亡均增加,50-100MOI早期凋亡增加趨勢(shì)降低,晚期凋亡減少。