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文檔簡介
1、類胰島素生長因子-I(IGF-I)是人體內(nèi)一種重要的生長因子,它對組織細(xì)胞的增殖、分化、凋亡及整個機(jī)體的生長發(fā)育及腫瘤的發(fā)生發(fā)展均起著重要的調(diào)節(jié)作用。有研究表明,血液中IGF-I的水平與乳腺癌發(fā)生的幾率呈高度正相關(guān)。
雌激素受體α(ERα)是類固醇激素受體超家族的成員之一,是一種配體依賴性轉(zhuǎn)錄因子,它與雌激素特異性結(jié)合,通過雌激素應(yīng)答元件(EREs)來調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄。ERα在70%的原發(fā)浸潤性乳腺癌病例中都有表達(dá),是激素拮
2、抗治療的重要靶標(biāo),目前有多種抗雌激素的藥物都是針對ERα設(shè)計的。
在一些乳腺癌細(xì)胞中,IGF-IR和ER均存在表達(dá),這二者的信號通路存在復(fù)雜的相互作用。由于ER是一個促乳腺癌基因,這種相互作用對于乳腺癌的發(fā)生發(fā)展來說非常重要。在體外條件下,pmol或是nmol濃度的IGF-I和IGF-II就可以刺激ERα陽性細(xì)胞的增殖,而ERα陰性的細(xì)胞只有微量的反應(yīng)或是完全沒有反應(yīng),揭示出IGF的活性對ERα的依賴。
基于
3、上述原因,通過研究加深對IGF與ERα之間相互作用的認(rèn)識,對于理解乳腺癌的發(fā)生及發(fā)展意義重大。
本課題采用RNA干擾的方法,通過穩(wěn)定轉(zhuǎn)染可以表達(dá)靶向ERα的shRNA的質(zhì)粒,由ERα陽性的乳腺癌細(xì)胞系MCF-7,構(gòu)建出ERα敲減的細(xì)胞株,獲得ERα表達(dá)抑制在50%以上的穩(wěn)定細(xì)胞株。在此基礎(chǔ)上,用IGF-I處理所獲得的ERα穩(wěn)定抑制細(xì)胞株,同時以轉(zhuǎn)染了陰性對照載體的細(xì)胞作為對照,用雙向電泳技術(shù)分析兩種細(xì)胞蛋白質(zhì)組的差異。選擇
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