雙氫青蒿素對頭頸部鱗癌細胞增殖抑制作用及化療藥物敏感性影響的研究.pdf

1、目的：研究雙氫青蒿素(Dihydroartemisinin,DHA)對喉癌細胞Hep-2及舌癌細胞Cal-27增殖抑制作用的影響，初步研究DHA聯(lián)合順鉑(Cisplatin,DDP)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)以及紫杉醇(Paclitaxel,PTX)對Hep-2及Cal-27細胞增殖抑制作用的影響，探究DHA是否可通過作用于Stat3通路影響化療藥物的作用，尋求腫瘤聯(lián)合化療的新策略。
　　方法：

2、>　　1、體外培養(yǎng)喉癌細胞Hep-2、舌癌細胞Cal-27,使用不同濃度的DHA（0、10μM、20μM、40μM、80μM、160μM、320μM）分別作用24h、36h、48h,使用MTT法對細胞增殖情況進行檢測。
　　2、使用不同濃度的DDP（0、0.5μg/ml、1μg/ml、2μg/ml）、5-FU（0、4μg/ml、20μg/ml、100μg/ml）、PTX（0、1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml）或其與1

3、0μM的DHA聯(lián)合應(yīng)用，分別作用于Hep-2細胞及Cal-27細胞24h、48h,使用MTT法對細胞增殖情況進行檢測。
　　3、使用DDP（1μg/ml）、5-FU（20μg/ml）、PTX（10ng/ml）或其與10μM的DHA聯(lián)合應(yīng)用，作用于Hep-2細胞及Cal-27細胞24h、48h后，使用Westernblot法檢測蛋白Stat3,p-Stat3及凋亡相關(guān)蛋白Bcl-xl的表達情況。
　　結(jié)果：
　　1.1不

4、同濃度的DHA對喉癌細胞Hep-2增殖均有抑制作用，使用析因方差分析顯示，其抑制作用呈時間（Ft=4.945，P=0.03＜0.05）、劑量（Fc=42.715，P=0.00＜0.01）依賴性。DHA作用于人喉癌細胞Hep-2在24小時、36小時、48小時使用，使用CompuSyn軟件計算IC50結(jié)果為：105.972μM、61.096μM、58.179μM。
　　1.2不同濃度的DHA處理舌癌Cal-27細胞不同時間，所得結(jié)果顯

5、示，其抑制作用呈時間（Ft=58.476，P=0.00＜0.01）、劑量（Fc=450.735，P=0.00＜0.01）依賴性。DHA作用于人舌癌細胞Cal-27在24小時、36小時、48小時的IC50結(jié)果分別為：103.234μM、61.729μM、52.676μM。
　　2.1DHA與常用化療藥物聯(lián)合應(yīng)用對喉癌Hep-2細胞增殖的影響。使用MTT法測細胞生存率，析因方差分析各組間的差異，使用ComPusyn軟件繪制24小時及4

6、8小時兩藥物的等效線。（1）DDP作用于Hep-2細胞，對Hep-2細胞的抑制呈時間(Ft=26.141，P=0.00＜0.01)、劑量(Fc=95.983，P=0.00＜0.01)依賴性。10μM的DHA與不同濃度的DDP聯(lián)合應(yīng)用作用24小時、48小時均呈協(xié)同作用。（2）體外培養(yǎng)Hep-2細胞，不同濃度的5-FU作用24小時、48小時，對于細胞的抑制作用呈時間(Ft=422.750,P=0.00＜0.01)、劑量（Fc=39.988，

7、P=0.00＜0.01）依賴性。等效線法分析顯示：在24小時、48小時，不同濃度的5-FU與10μM的DHA聯(lián)合應(yīng)用，均呈協(xié)同作用。（3）PTX作用于Hep-2細胞，對細胞的抑制呈時間（Ft=245.324,P=0.00<0.01）、劑量（Fc=195.628,P=0.00<0.01）依賴性。等效線法分析結(jié)果顯示：兩藥聯(lián)合作用呈協(xié)同作用。
　　2.2DHA與常用化療藥物聯(lián)合應(yīng)用對舌癌Cal-27細胞的影響。（1）DDP及DDP聯(lián)合

8、10μM的DHA對Cal-27細胞均有抑制作用。呈時間（Ft=22.395,P=0.00<0.01）、劑量（Fc=71.572，P=0.00<0.01）依賴性。10μM的DHA與不同濃度的DDP聯(lián)合應(yīng)用，在24小時及48小時各濃度均呈協(xié)同作用。（2）5-FU及5-FU與DHA聯(lián)合組作用，對細胞增殖的抑制呈時間（Ft=1893.202，P=0.00<0.01）、劑量依賴性（Fc=1865.411，P=0.00<0.01）。藥物處理24小時

9、、48h后，5-FU各濃度與DHA均呈協(xié)同作用。（3）PTX對細胞作用呈時間（Ft=478.170,P=0.00<0.01）、劑量依賴性（Fc=547.807,P=0.00<0.01）。等效線圖解法結(jié)果顯示：PTX各濃度與DHA聯(lián)合作用在24小時及48小時均呈協(xié)同作用。
　　3、Westernblot檢測DHA與DDP、5-FU、PTX聯(lián)合應(yīng)用于Hep-2及Cal-27細胞后，Stat3、p-Stat3及凋亡相關(guān)蛋白Bcl-xl表

10、達水平的變化，使用單因素方差對結(jié)果進行分析。其中各組Stat3表達均無差別（P>0.05），對于p-Stat3、Bcl-xl的表達進行分析。（1）DDP與DHA聯(lián)用組與單藥組相比，p-Stat3（P=0.00＜0.01）、Bcl-xl（P=0.00＜0.01）的表達明顯減少。DHA可能通過影響Stat3通路影響增加DDP對Hep-2、Cal-27細胞的敏感性。（2）Hep-2及Cal-27細胞在給予DHA聯(lián)合5-FU處理后與單藥組相比，

11、p-Stat3（P=0.00＜0.01）及凋亡相關(guān)蛋白Bcl-xl（P=0.00＜0.01）明顯減少。可見DHA能夠通過影響Stat3通路影響5-FU對兩細胞的抑制作用。（3）PTX聯(lián)合DHA作用于Hep-2細胞及Cal-27細胞。PTX單藥組及DHA聯(lián)合PTX組p-Stat3表達均升高，且聯(lián)合組增高更明顯。DHA與PTX聯(lián)用對細胞增殖的抑制可能并非通過影響Stat3通路作用。檢測其下游凋亡相關(guān)蛋白Bcl-xl表達，顯示聯(lián)合組Bcl-x