不同表達水平微小RNA-155對人滋養(yǎng)細胞增殖的影響.pdf

1、背景和目的：微小RNA-155(miR-155)在子癇前期患者胎盤組織的表達量較正常孕婦顯著升高，miR-155可調(diào)控細胞周期蛋白的表達。本實驗主要研究不同表達水平的miR-155通過靶向調(diào)節(jié)細胞周期蛋白影響人滋養(yǎng)細胞的增殖。
　　 方法：通過生物信息學(xué)檢索發(fā)現(xiàn)，細胞周期蛋白D1(cyclin D1)是miR-155的靶基因之一。將PCR擴增的miR-155基因片段(單拷貝和雙拷貝)克隆于pEGFP-C1質(zhì)粒中，構(gòu)建不同miR-

2、155基因拷貝數(shù)的重組質(zhì)粒pEGFP-miR-155；實驗分單拷貝組，雙拷貝組和對照組三組，分別將含單拷貝、雙拷貝miR-155基因片段的pEGFP-miR-155和pEGFP-C1空載體轉(zhuǎn)染入人滋養(yǎng)細胞株HTR-8/SV neo中；轉(zhuǎn)染后24h，利用實時定量PCR檢測細胞內(nèi)miR-155和cyclin D1 mRNA的表達，Western-Blotting檢測cyclin D1蛋白水平的表達；利用流式細胞技術(shù)檢測HTR-8/SV ne

3、o細胞周期；CCK-8試劑盒檢測HTR-8/SV neo細胞增殖能力。
　　 結(jié)果：轉(zhuǎn)染24h后，單拷貝組和雙拷貝組miR-155的表達分別較對照組上升1.54±0.09和2.15±0.12倍，且雙拷貝組顯著高于單拷貝組(P<0.05，n=5)；單拷貝組和雙拷貝組cyclin D1 mRNA的表達水平分別是對照組的0.6±0.05倍和0.39±0.02倍，且雙拷貝組顯著低于單拷貝組(P<0.05，n=5)。對照組，單拷貝組和雙拷

4、貝組HTR-8/SV neo細胞G1期分別為44.9±3.22％，49.5±1.25％和52.9±4.23％，S期分別為44.1±2.36％，41.0±2.12％和36.9±1.85％；單拷貝組和雙拷貝組的細胞增殖活力分別為對照組的79.13±4.5％和59.52±3.3％。單拷貝組和雙拷貝組cyclin D1 mRNA水平和蛋白水平分別較對照組明顯降低，且雙拷貝組降低更明顯。
　　 結(jié)論：miR-155可在體外下調(diào)細胞周期蛋白