枸杞多糖對熱應激大鼠生精細胞凋亡的保護作用及其機制的研究.pdf

1、[目的]
　　研究枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharides，LBP)對熱應激所致睪丸生精細胞凋亡相關蛋白Bax、Caspase-3和細胞色素C(cytochrome c，Cyt C)以及胞漿內(nèi)CytC濃度的影響，探討枸杞多糖在熱應激所致睪丸生精細胞凋亡進程中所起的保護作用及其作用機制。
　　[方法]
　　成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠90只，隨機分為5組:正常對照組、熱

2、應激組(HS)、枸杞多糖高(HLBP)、中(MLBP)、低(LLBP)劑量組[劑量分別為100mg/(kg·d)、50mg/(kg·d)、10mg/(kg·d)]，每組18只。各組再按熱應激后24h、48h和7d隨機分成3個亞組，每組6只大鼠。枸杞多糖組大鼠給予以上劑量的枸杞多糖灌胃，每天一次，連續(xù)14d。正常對照組和熱應激組給予等量生理鹽水灌胃。于第15d，熱應激組和枸杞多糖組大鼠予43℃恒溫水浴30min，對照組浸于22℃水浴中30

3、min。熱應激后24h、48h和7d頸椎脫臼處死大鼠，取出睪丸。采用HE染色檢測睪丸組織形態(tài)學改變，末端DNA轉(zhuǎn)移酶缺刻末端標記法(TdT-mediated dUDP nick end labeling，TUNEL)檢測生精細胞凋亡，免疫組化法檢測Bax、Caspase-3和Cyt C蛋白的表達，采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測睪丸組織胞漿Cyt C的濃度。
　　[結果]
　　1.組織學觀察:與正常組比較，熱應激后大鼠睪丸

4、組織生精上皮變薄，生精細胞排列紊亂，數(shù)量減少，生精小管明顯縮小。與熱應激組比較，枸杞多糖組生精上皮明顯增厚，生精細胞排列紊亂較輕，生精細胞數(shù)量增多，并且LBP組大鼠體重（應激后48h、7d）、睪丸重量、睪丸指數(shù)及生精小管直徑明顯增加(P＜0.05)，以10mg/(kg.d)組增加最為顯著。
　　2.TUNEL法檢測生精細胞凋亡:對熱應激后睪丸生精細胞的凋亡指數(shù)(apoptotic index，AI)進行分析，發(fā)現(xiàn)熱應激后，熱應激組

5、和LBP組AI明顯增加(P＜0.05)，但各LBP組AI均比熱應激組明顯降低(P＜0.05)，以10mg/(kg.d)劑量組效果最明顯。
　　3.睪丸生精細胞凋亡蛋白Cyt C、Bax、Caspase-3的表達情況:與熱應激組比較，各LBP組Cyt C、Bax、Caspase-3的表達均明顯降低(P＜0.05)，以10mg/(kg.d)劑量組效果最明顯。
　　4.睪丸組織胞漿內(nèi)細胞色素C濃度的變化情況:與熱應激組比較，各LB

6、P組胞漿內(nèi)CytC的濃度明顯降低(P＜0.05)，以10mg/(kg.d)劑量組效果最明顯。
　　[結論]
　　1.枸杞多糖能使熱應激后睪丸組織生精上皮明顯增厚，生精細胞排列紊亂較輕，生精細胞數(shù)量增多，生精小管增大，并且能增加熱應激后的大鼠體重、睪丸重量、睪丸指數(shù)及生精小管直徑。
　　2.枸杞多糖預處理能降低生精細胞Cyt C、Bax、Caspase-3蛋白的表達，降低睪丸組織胞漿內(nèi)細胞色素C濃度，抑制生精細胞的凋亡，