枸杞多糖對熱應(yīng)激大鼠生精細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、[目的]
　　研究枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharides，LBP)對熱應(yīng)激所致睪丸生精細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Bax、Caspase-3和細(xì)胞色素C(cytochrome c，Cyt C)以及胞漿內(nèi)CytC濃度的影響，探討枸杞多糖在熱應(yīng)激所致睪丸生精細(xì)胞凋亡進(jìn)程中所起的保護(hù)作用及其作用機(jī)制。
　　[方法]
　　成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠90只，隨機(jī)分為5組:正常對照組、熱

2、應(yīng)激組(HS)、枸杞多糖高(HLBP)、中(MLBP)、低(LLBP)劑量組[劑量分別為100mg/(kg·d)、50mg/(kg·d)、10mg/(kg·d)]，每組18只。各組再按熱應(yīng)激后24h、48h和7d隨機(jī)分成3個亞組，每組6只大鼠。枸杞多糖組大鼠給予以上劑量的枸杞多糖灌胃，每天一次，連續(xù)14d。正常對照組和熱應(yīng)激組給予等量生理鹽水灌胃。于第15d，熱應(yīng)激組和枸杞多糖組大鼠予43℃恒溫水浴30min，對照組浸于22℃水浴中30

3、min。熱應(yīng)激后24h、48h和7d頸椎脫臼處死大鼠，取出睪丸。采用HE染色檢測睪丸組織形態(tài)學(xué)改變，末端DNA轉(zhuǎn)移酶缺刻末端標(biāo)記法(TdT-mediated dUDP nick end labeling，TUNEL)檢測生精細(xì)胞凋亡，免疫組化法檢測Bax、Caspase-3和Cyt C蛋白的表達(dá)，采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測睪丸組織胞漿Cyt C的濃度。
　　[結(jié)果]
　　1.組織學(xué)觀察:與正常組比較，熱應(yīng)激后大鼠睪丸

4、組織生精上皮變薄，生精細(xì)胞排列紊亂，數(shù)量減少，生精小管明顯縮小。與熱應(yīng)激組比較，枸杞多糖組生精上皮明顯增厚，生精細(xì)胞排列紊亂較輕，生精細(xì)胞數(shù)量增多，并且LBP組大鼠體重（應(yīng)激后48h、7d）、睪丸重量、睪丸指數(shù)及生精小管直徑明顯增加(P＜0.05)，以10mg/(kg.d)組增加最為顯著。
　　2.TUNEL法檢測生精細(xì)胞凋亡:對熱應(yīng)激后睪丸生精細(xì)胞的凋亡指數(shù)(apoptotic index，AI)進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)熱應(yīng)激后，熱應(yīng)激組

5、和LBP組AI明顯增加(P＜0.05)，但各LBP組AI均比熱應(yīng)激組明顯降低(P＜0.05)，以10mg/(kg.d)劑量組效果最明顯。
　　3.睪丸生精細(xì)胞凋亡蛋白Cyt C、Bax、Caspase-3的表達(dá)情況:與熱應(yīng)激組比較，各LBP組Cyt C、Bax、Caspase-3的表達(dá)均明顯降低(P＜0.05)，以10mg/(kg.d)劑量組效果最明顯。
　　4.睪丸組織胞漿內(nèi)細(xì)胞色素C濃度的變化情況:與熱應(yīng)激組比較，各LB

6、P組胞漿內(nèi)CytC的濃度明顯降低(P＜0.05)，以10mg/(kg.d)劑量組效果最明顯。
　　[結(jié)論]
　　1.枸杞多糖能使熱應(yīng)激后睪丸組織生精上皮明顯增厚，生精細(xì)胞排列紊亂較輕，生精細(xì)胞數(shù)量增多，生精小管增大，并且能增加熱應(yīng)激后的大鼠體重、睪丸重量、睪丸指數(shù)及生精小管直徑。
　　2.枸杞多糖預(yù)處理能降低生精細(xì)胞Cyt C、Bax、Caspase-3蛋白的表達(dá)，降低睪丸組織胞漿內(nèi)細(xì)胞色素C濃度，抑制生精細(xì)胞的凋亡，