褪黑素對(duì)噪聲應(yīng)激大鼠肝損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制

1、<p>　　褪黑素對(duì)噪聲應(yīng)激大鼠肝損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制</p><p>　　【摘要】 目的： 探討褪黑素（MT）對(duì)噪聲應(yīng)激大鼠肝損傷的保護(hù)作用及可能機(jī)制. 方法： 將40只雄性SD大鼠隨機(jī)分為5組： 空白對(duì)照組、模型1組、模型2組、實(shí)驗(yàn)1組、實(shí)驗(yàn)2組，每組8只. 實(shí)驗(yàn)組和模型組分別在應(yīng)激前30 min腹腔注射MT(15 mg/kg)和等體積生理鹽水. 以56式?jīng)_鋒槍射擊時(shí)產(chǎn)生的120 dB（A）的脈

2、沖噪聲，對(duì)實(shí)驗(yàn)組及模型組大鼠進(jìn)行連續(xù)噪聲刺激. 噪聲應(yīng)激后，觀察MT對(duì)各組大鼠血漿中皮質(zhì)醇、超氧化物歧化酶（SOD），丙二醛（MDA）以及肝組織勻漿中SOD，MDA的影響. 結(jié)果： 肝臟病理檢查顯示模型組大鼠出現(xiàn)明顯的病理性損傷,實(shí)驗(yàn)組大鼠損傷程度明顯減輕；模型組大鼠血漿皮質(zhì)醇、血漿及肝組織勻漿的MDA濃度較空白對(duì)照組顯著升高，血漿及肝組織勻漿SOD活性顯著降低(P&lt;0.01)，實(shí)驗(yàn)組大鼠血漿皮質(zhì)醇的濃度、血漿及肝組織勻漿

3、的MDA濃度較模型組顯著降低，血漿及肝組織勻漿SOD活性顯著升高(P&lt;0.01). 結(jié)論： MT能減輕噪聲引起的大鼠肝損傷，其機(jī)制可能與抑制脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)有關(guān). </p><p>　　【關(guān)鍵詞】 褪黑素 噪聲 肝/損傷 皮質(zhì)醇 超氧化物歧化酶 丙二醛</p><p><b>　　0引言</b></p><p>　　研究表明，噪聲

4、不僅能夠引起記憶力減退，還可以對(duì)機(jī)體的血液循環(huán)系統(tǒng)、內(nèi)臟器官和中樞神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生危害［1-2］. 目前，國(guó)內(nèi)鮮見對(duì)噪聲所致肝功能損害的防治報(bào)道. 我們觀察了MT對(duì)噪聲應(yīng)激大鼠肝臟功能的影響，并通過(guò)測(cè)定大鼠血漿激素濃度的變化探討其可能發(fā)生的機(jī)制，為肝功能損害的防治提供理論依據(jù).</p><p><b>　　1材料和方法</b></p><p>　　1.1材料健康雄性SD大

5、鼠40只，12 wk齡，體質(zhì)量(280±30) g(第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供). 為消除MT分泌的生物節(jié)律對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響,于每日8∶00AM時(shí)開始實(shí)驗(yàn). MT（Sigma公司）；超氧化物歧化酶（SOD）測(cè)試盒、丙二醛（MDA）測(cè)試盒（南京建成生物工程研究所）；皮質(zhì)醇測(cè)試盒（北京北方偉業(yè)發(fā)展有限公司）. XH2060型全自動(dòng)γ免疫分析儀(中國(guó)核工業(yè)部西安二六二廠).</p><p><b&g

6、t;　　1.2方法</b></p><p>　　1.2.1動(dòng)物給藥將40只雄性SD大鼠在7 d環(huán)境適應(yīng)期后隨機(jī)分為5組：空白對(duì)照組、模型1組、模型2組、實(shí)驗(yàn)1組、實(shí)驗(yàn)2組，每組8只，模型組及實(shí)驗(yàn)組給予每日120 dB（A）噪聲連續(xù)應(yīng)激8 h，第1組應(yīng)激1 d，第2組應(yīng)激3 d，每次噪聲刺激前30 min根據(jù)分組,實(shí)驗(yàn)組腹腔注射MT(15 mg/kg)，模型組腹腔注射等量生理鹽水.</p>

7、<p>　　1.2.2槍擊噪音應(yīng)激模型的建立［3］大鼠禁食12 h后置于隔音室內(nèi)，用56式?jīng)_鋒槍射擊時(shí)產(chǎn)生的噪音制成錄音，通過(guò)揚(yáng)聲器由電腦控制隨機(jī)播放，揚(yáng)聲器距離大鼠20～30 cm. 采用國(guó)營(yíng)紅聲器材廠生產(chǎn)的ND2型精密聲級(jí)計(jì)及頻譜分析儀分析檢測(cè)，控制噪音強(qiáng)度為120 dB（A），頻率為0.25～4.00 kHz.</p><p>　　1.2.3血液中皮質(zhì)醇含量、SOD活性及MDA含量的測(cè)定各組大鼠

8、應(yīng)激結(jié)束后，麻醉，開胸取血4 mL，其中2 mL加入100 g/L乙二胺四乙酸鈉30 μL和抑肽酶40 μL的離心管中，混勻，于4℃，3000 r/min離心10 min，離心半徑12 cm，分離血漿，-20℃下保存待測(cè)定. 采用放射免疫法測(cè)定血漿中皮質(zhì)醇含量. 操作程序嚴(yán)格按照試劑盒及儀器說(shuō)明書由1人完成檢測(cè). 另外2 mL血液于3000 r/min離心10 min，離心半徑12 cm，吸取上清液，-20℃下保存待測(cè)定. 嚴(yán)格按照試劑

9、盒說(shuō)明書進(jìn)行操作，測(cè)量SOD活性及MDA含量.</p><p>　　1.2.4肝組織勻漿中SOD活性及MDA含量的測(cè)定取血后，將大鼠處死，取肝臟組織洗去殘血并吸干水分，用天平稱取1 g肝臟組織，用生理鹽水配置成100 g/L組織勻漿. 于3000 r/min離心10 min，離心半徑12 cm，吸取上清液，-20℃下保存待測(cè)定. 嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作，測(cè)量SOD活性及MDA含量.</p>&

10、lt;p>　　1.2.5肝組織的病理學(xué)檢測(cè)將部分肝組織洗去殘血并吸干水分，放入40 g/L甲醛溶液中4℃保存，送第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院病理科做病理學(xué)切片檢查.</p><p>　　統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：所有數(shù)據(jù)均以x±s表示，結(jié)果采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析,均數(shù)間的多重比較用LSDt進(jìn)行顯著性檢驗(yàn).</p><p><b>　　2結(jié)果</b><

11、;/p><p>　　2.1各組大鼠血漿皮質(zhì)醇的變化空白對(duì)照組、模型1組、模型2組、實(shí)驗(yàn)1組、實(shí)驗(yàn)2組血漿皮質(zhì)醇濃度分別為（0.95±0.10）,（1.99±0.08）,（2.59±0.09）,（1.27±0.14）,（1.63±0.09）. 模型1組、模型2組大鼠血漿皮質(zhì)醇均較空白對(duì)照組顯著升高（P&lt;0.01），實(shí)驗(yàn)1組較模型1組顯著降低（P&l

12、t;0.01），實(shí)驗(yàn)2組較模型2組顯著降低（P&lt;0.01）.</p><p>　　2.2各組大鼠血漿及肝組織勻漿SOD， MDA的變化模型1組及模型2組顯著低于空白對(duì)照組（P&lt;0.01，表1），實(shí)驗(yàn)1組較模型1組顯著升高（P&lt;0.01），實(shí)驗(yàn)2組較模型2組顯著升高（P&lt;0.01）. 各組大鼠血漿肝組織勻漿MDA水平比較，模型1組及模型2組較空白對(duì)照組顯著升高

13、（P&lt;0.01），實(shí)驗(yàn)1組較模型1組顯著降低（P&lt;0.01或0.05），實(shí)驗(yàn)2組較模型2組顯著降低（P&lt;0.01）.</p><p>　　表1MT對(duì)噪聲應(yīng)激大鼠血漿肝組織勻漿SOD，MDA的影響（略）</p><p>　　bP&lt;0.01 vs 空白對(duì)照組； dP&lt;0.01 vs 模型1組； fP&lt;0.01

14、vs 模型2組.</p><p>　　2.3各組大鼠肝臟組織形態(tài)學(xué)模型組比實(shí)驗(yàn)組肝臟組織明顯充血水腫，有較多炎細(xì)胞浸潤(rùn)，肝小葉結(jié)構(gòu)受到破壞，細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，有部分肝細(xì)胞變性（圖1）. 其中模型2組較模型1組嚴(yán)重. 實(shí)驗(yàn)1組、實(shí)驗(yàn)2組肝細(xì)胞損傷明顯減輕.</p><p><b>　　3討論</b></p><p>　　應(yīng)激是機(jī)體在受到各種因素刺激

15、時(shí)所出現(xiàn)的一些非特異性反應(yīng)，而下丘腦垂體腎上腺皮質(zhì)激素系統(tǒng)(HPA軸)是應(yīng)激系統(tǒng)的重要組成部分［4］，機(jī)體主要是通過(guò)HPA軸來(lái)調(diào)節(jié)機(jī)體完成對(duì)應(yīng)激的適應(yīng). HPA軸興奮時(shí)，促腎上腺激素釋放激素（CRH）合成增加，刺激垂體前葉釋放促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）進(jìn)而增加糖皮質(zhì)激素分泌，血漿皮質(zhì)激素水平是其最終表現(xiàn)形式. 研究發(fā)現(xiàn)，心理應(yīng)激可導(dǎo)致大鼠血漿內(nèi)的皮質(zhì)激素顯著上升［5］. 我們的實(shí)驗(yàn)也表明，急性的噪聲應(yīng)激會(huì)導(dǎo)致大鼠血漿內(nèi)的皮質(zhì)醇水平

16、較正常狀態(tài)下大鼠顯著升高，并且隨應(yīng)激時(shí)間的延長(zhǎng)升高更加明顯.</p><p>　　褪黑素(MT)是松果腺分泌的一種吲哚類的化學(xué)物質(zhì),對(duì)應(yīng)激反應(yīng)有著重要影響. MT的合成分泌與日照周期同步,呈現(xiàn)極顯著的晝低夜高的生理性節(jié)律波動(dòng)［6］，并且與HPA軸所涉及的激素分泌節(jié)律恰恰相反，這提示兩者可能有著一定的關(guān)系. 研究表明，腹腔注射0.2 mg/kg劑量的MT即可改善外源性皮質(zhì)醇所誘導(dǎo)的大鼠血漿ACTH及皮質(zhì)酮水平下降［

17、7］. 為避免內(nèi)源性MT對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，本實(shí)驗(yàn)在早8時(shí)開始. 實(shí)驗(yàn)顯示，兩實(shí)驗(yàn)組的血漿皮質(zhì)醇水平均顯著低于相應(yīng)模型組，盡管略高于空白對(duì)照組，但已無(wú)顯著差異. 這說(shuō)明外源性的MT可以使大鼠血漿內(nèi)的皮質(zhì)激素水平接近于正常水平，提示可能機(jī)體應(yīng)激狀態(tài)有所改善.</p><p>　　A: 空白對(duì)照組HE ×100; B: 模型1組HE ×400; C: 實(shí)驗(yàn)1組HE ×400; D: 模型2

18、組HE ×400; E: 實(shí)驗(yàn)2組HE ×400.</p><p>　　圖1各組大鼠肝臟組織形態(tài)（略）</p><p>　　超氧化物歧化酶(SOD)是一類廣泛存在于生物體內(nèi)含不同金屬元素的酶蛋白,是唯一能夠催化超氧陰離子自由基發(fā)生歧化反應(yīng)的生物酶, 使超氧自由基分解,快速清除體內(nèi)過(guò)剩的氧自由基. 機(jī)體在處于應(yīng)激狀態(tài)時(shí)，體內(nèi)的氧自由基含量可以明顯高于正常狀態(tài). 而丙二醛（

19、MDA）是機(jī)體氧自由基與生物膜多不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化的產(chǎn)物,其產(chǎn)生的量與氧自由基的量及脂質(zhì)過(guò)氧化的程度呈正相關(guān),故檢測(cè)MDA 可反映氧自由基的水平及脂質(zhì)過(guò)氧化的程度. 本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)組大鼠血清及肝臟中SOD活性和MDA含量較空白對(duì)照組均有明顯升高，說(shuō)明噪聲可以損傷到肝臟組織的正常功能.</p><p>　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，噪聲可使大鼠處于明顯的應(yīng)激狀態(tài)，興奮HPA軸，提高血漿內(nèi)皮質(zhì)醇水平，并且隨應(yīng)激的加強(qiáng)皮

20、質(zhì)醇水平升高更加明顯. 在HPA軸的影響下，大鼠血清及肝勻漿的SOD活性和MDA含量產(chǎn)生異常變化，同時(shí)肝臟功能受到損害. 而外源性的MT抑制了應(yīng)激所導(dǎo)致的HPA軸的興奮，使血清中SOD活性和MDA含量接近于正常水平，拮抗了應(yīng)激所致的肝臟功能紊亂. 病理檢查結(jié)果也顯示，實(shí)驗(yàn)組的肝組織較模型組損傷明顯減輕. 我們既往的研究也發(fā)現(xiàn)，MT對(duì)酒精所誘導(dǎo)的肝損傷具有保護(hù)作用［8］. 由于MT在人體內(nèi)尚未發(fā)現(xiàn)毒性作用，在多種動(dòng)物體內(nèi)也未建立其半數(shù)致死

21、劑量(LD50)，故其臨床應(yīng)用具有較高的安全性. 進(jìn)一步開展MT的臨床研究，可望使其成為應(yīng)激性肝臟功能紊亂治療措施的一種新選擇.</p><p><b>　　【參考文獻(xiàn)】</b></p><p>　?。?］ 孫喜慶，劉挺松，曹新生，等. +6 Gz和噪聲復(fù)合應(yīng)激對(duì)大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響［J］. 第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2004,25(21):1928-1931.</p&g

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