己烯雌酚對性反轉雞性別決定相關基因及學習記憶的影響.pdf

1、環(huán)境激素是具有動物內分泌干擾作用的化合物，廣泛存在于自然界。由環(huán)境激素引起的動物內分泌系統(tǒng)、神經系統(tǒng)和生殖系統(tǒng)功能的異常，嚴重威脅人類健康和野生動物遺傳安全性，成為社會發(fā)展需要面對的重大科學課題。人工合成雌激素己烯雌酚(DES)，曾作為藥物及飼料添加劑廣泛使用，后發(fā)現其具有較高的生殖毒性，已被禁用。目前，DES作為研究環(huán)境激素作用的藥物模型，仍受到廣泛關注。本文以DES為代表，研究了環(huán)境雌激素對雞生殖系統(tǒng)和性別決定相關基因的影響，調查了

2、DES對胚胎暴露雛雞神經系統(tǒng)發(fā)育和學習記憶能力的影響，結果如下： 比較了幾種常用的注射方法在雞不同胚胎發(fā)育時期的注射效果，探討DES對雞胚影響的評價方法。采用雞性連鎖基因CHD標記雞胚的遺傳性別，結合性腺器官和組織切片觀察，調查了DES暴露引起的雞生殖系統(tǒng)變化。結果發(fā)現，在雞受精卵孵化開始前(EO)采用卵黃注射，胚胎存活率、孵化率最高。0.1mg/eggDES暴露，可以實現衣莎褐品種雞胚性別的完全轉化，使ZZ基因型雄性雞性腺發(fā)育

3、為卵巢，性腺組織結構發(fā)生明顯雌性化變化，表現為精小管消失，近腔面空泡增多，并出現大量的卵巢髓質血管組織。表明DES能抑止精原細胞增殖，影響雄性性腺的發(fā)育和生理功能，導致性腺雌性化發(fā)育。證明我們已經建立了高效的DES誘發(fā)雌性化性反轉雞胚技術。 采用半定量RT-RCR方法，調查DES引起的性反轉雞胚中孤兒核受體類固醇生成因子(SF1)、抗繆勒氏管激素(AMH)、兩性和鼠源單克隆抗體-3相關轉錄因子1(DMRT1)、W染色體蛋白激酶C

4、抑制因子(WPKCI)、雌特異性表達轉錄因子1(FET1)、先天性瞼裂狹小綜合癥基因(FOXL2)6種性別決定相關基因在性腺分化發(fā)育過程中的時序表達，從基因水平尋找DES引起性反轉的原因，進一步探討雞(鳥類)性別決定相關基因的調控網絡和作用機制。結果表明，雞胚胎期DES暴露，能上調3d-11d(E3-E11)遺傳雄性(性反轉雌性)雞胚中SF1基因的表達量，表明SF1基因可能具有促雌化效應。AMH在脊椎動物中具有促進雄性發(fā)育的作用，正常雞

5、胚E7以后才檢測到表達，并且在雄性性腺中的表達量顯著高于雌性。DES暴露后，遺傳雌性雞胚性腺中AMH的表達受到抑制；性反轉雌性中表達上調，但對DES暴露導致的雌性化沒有抑制作用。因此認為，AMH基因主要是影響性別決定后(7d后)雄性雞胚性腺的生長和發(fā)育，對早期性別決定和分化可能沒有重要影響。DMRT1基因與雄性性別決定密切相關，DES暴露抑制了DMRT1在性別分化前和分化啟動時期(E3-E7)的表達。表明該基因對雄性決定至關重要，DMR

6、T1基因在遺傳雄性雞胚性腺中表達量的下調可能直接促使了其雌性化反轉的發(fā)生。WPKCI基因只在遺傳雌性個體表達，胚胎DES暴露后，導致WPKCI基因在性別分化期(E7-E11)表達量顯著上調。表明WPKCI對卵巢的形成和發(fā)育有十分重要的促進作用。FET1基因是低表達量的雌特異性基因，胚胎DES暴露，能夠引起11d(E11)時期的表達量短暫上調，但在其他調查時期沒有檢測到轉錄產物。推測FET1基因可能只與性別分化后(11d后)的雌性生殖腺生

7、長和發(fā)育相關。FOXL2基因在DES暴露后，13d(E13)時期的表達量較高，而其前幾乎檢測不到轉錄產物。推測，FOXL2基因在DES暴露導致的雌性化過程中所起的作用較小，可能通過參與雌激素的合成，在性別分化后的雌性生殖腺生長和發(fā)育過程中產生影響。 采用一次性被動回避(PAL)和繞行學習兩種國際通用的小雞實驗模型，調查了胚胎期DES暴露后，孵化1d齡和9d齡雛雞學習記憶能力的變化。結果表明，正常的雌性和雄性雛雞之間的學習記憶能力